Livin基因转染对人骨肉瘤U-2OS细胞生长及化疗敏感性影响.pdf

·中文论著摘要· Livi n基因转染对人骨肉瘤U-20S坌I]]胞 生长及化疗敏感性的影响 ．^』．-J一 刖 吾 of Livin是近年来发现的人类凋亡抑制蛋白(inhibitorapoptosisfamilyofprotein， lAP)家族的新成员，在多数肿瘤组织中高表达，如黑色素瘤、乳腺癌、宫颈癌、结 肠癌、膀胱癌、胃癌、前列腺癌、白血病以及淋巴瘤等。我们的前期研究表明，Livin 在人正常组织中不表达，在骨肉瘤组织中表达；有研究表明肺癌的患者并且经过化 学治疗的患者Livin表达水平明显升高，表明在化疗药物诱导癌细胞凋亡的同时，癌 细胞合成表达抗凋亡的因子(如Livin)引起凋亡耐受，这可能是临床上肿瘤发生耐药 的机制之一。进一步的体外实验证明，在黑色素瘤、淋巴瘤细胞、肺癌等中Livin的 过表达与化疗耐药有关。因此，Livin可能在肿瘤化疗耐药过程中发挥作用。 Livin基因在抗凋亡作用中的生物学功能及在抗骨肉瘤细胞凋亡作用中的具体 机制，以及其是否参与骨肉瘤细胞化疗耐药等还不清楚。我们构建了Livin真核表达 载体，基因转染并获得高表达Livin基因的骨肉瘤U．20S细胞，以探讨Livin基因对 U．20S细胞生长及化疗敏感性及凋亡耐受性的影响。 骨肉瘤是最常见的恶性骨肿瘤，恶性度高，预后差。其发生发展的过程尚不 清楚，临床上也缺乏特异性的病理诊断指标。Livin是近年来发现的人类凋亡抑制 蛋白家族的新成员，已发现在多数肿瘤中表达，与肿瘤发生有密切关系，可能作 为诱导肿瘤凋亡治疗的新靶点。Caspase．3被认为是哺乳动物细胞凋亡的关键蛋白 酶。然而，尚未见有关骨肉瘤患者Livin表达情况以及其与Caspase．3表达的关系， 与骨肉瘤发生、发展、生物学特性及临床诊断价值的报道。本研究采用SABC免疫 组化方法检测Livin和Caspase．3在骨肉瘤组织中的表达，探讨两者与骨肉瘤发生的 关系及其临床诊断价值。 骨肉瘤是人类常见的原发性问叶组织恶性骨肿瘤，常发生于青少年，传统截 肢疗法预后差，5qz生存率不到20％。目前虽在术前术后给予化疗后生存率有所提 高，但对于化疗耐受和转移复发的病例，化疗或手术常难以奏效。因此，应当在 肿瘤的生物治疗方面深入研究，以探索有效的辅助治疗方法，提高骨肉瘤的治愈 率。RNA干扰(RNA 用双链RNA(double．stranded RNA)在细胞内经Dicer酶的识别、结合、酶切产生有 活性的长度为21～23 interference ntd、干扰RNA(smallRNA,siRNA)，与目的基因 mRNA结合并使之降解，从而抑制目的基因的表达。RNAi的发现为基因治疗学提供 of 了更为有效的方法。Livin基因作为细胞凋亡抑制蛋白(inhibitor apoptosisprotein， tAP)家族的新成员，由于其具有在正常组织中不表达，而在人类肿瘤中高表达的特 性，有望成为肿瘤治疗的选择性靶点，近年来引起学者们的广泛关注。我们的前期 研究表明，Livin在人正常组织中不表达，在骨肉瘤组织中高表达，提示其在骨肉瘤的 发生、发展中起重要作用。本研究通过RNAi技术靶向抑制人骨肉瘤MG．63细胞 Livin基因表达，探讨利用体外转录的siRNA的方法诱导骨肉瘤细胞凋亡，从而为骨 肉瘤的基因治疗提供新策略。 目 的 第一部分： 探讨Livin和Caspase一3的表达在骨肉瘤发生中的可能作用及其临床 意义。第二部分： 研究转染Livin基因对人骨肉瘤U．20S细胞生长及化疗敏感性的 影响。第三部分： 靶向抑制人骨肉瘤MG．63细胞Livin基因表达，观察其在骨肉瘤细胞株MG．63中抑制 Livin表达后细胞增殖及细胞凋亡情况，从而为骨肉瘤的基因治疗提供新策略。