三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用.pdf

浙 江 大 学 学 报 工学版 ’ ( 第 卷第 期 ?*/@!A*@# ! # 年 月 )*+,-./*012345.-67-583,95:;’-65-33,5-6=53-3( )+/;$%% $%% # 三种启动子T 表达框的制备及其在 UVWXY 筛选有效Z[WXY 中的应用 倪 勤 刘克洲 羊正纲 姚航平 陈 智 P P P P 浙江大学 医学院附属第一医院传染病研究所 浙江 杭州 ’ P !I%%%!( 摘 要 为能快速经济地获取小干扰核糖核酸 设计采用特异性延伸引物和上游 B ’ (P ^ 9Q.//5-:3,03,5-6\A] 95\A] 下游两条通用引物 通过重叠延伸一步聚合酶链反应 法一次性快速 简捷地制备包含 或 ?./ P ’ ( ^ M‘I^ I _L\ 7 a :\A] 在内的三种人小 多聚酶 启动子 小发夹状 表达框 用该方法制备的增强型绿色荧光蛋白 D ’ ( @ \A] bbb \A] 92\A] 特异性三种启动子 表达框在转染 细胞后有效地抑制了 转基因表达 其中以 ’ ( D $ P cd_ 92\A] a3ec cd_ ?./ 表达框抑制效果最显著 且未检测到干扰素应答基因 的表达 表明该表达框可被 :\A] D P $ P 92\A] ffg]=Q\A] 有效转染并启动产生特异基因的 干扰效应 进而用于快速筛选最佳 位点及其最适搭配启动子 \A] P 95\A] @ 关键词 小干扰核糖核酸 核糖核酸多聚酶 启动子 筛选 增强型绿色荧光蛋白 B ’ (J bbb J J ’ ( 9