人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1启动子荧光素酶报告基因重组体的构建.pdf

Medical No．3 2∞8 ·217· 新乡医学院学报Jamlal0fXiIlxi∞gc0Ue萨V01．25May ·基础研究· 人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1启动子荧光素酶报告基因重组 体的构建 周广举1，梁自文1，陈渝2，王裴2，张小容2 (1．第三军医大学西南医院内分泌科，重庆枷038；2．第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆400038) 摘要： 目的构建内皮细胞高表达脂多糖相关因子l(EOLAl)基因启动子的报告基因重组质粒，为EOLAl启动 子的分析鉴定奠定基础。方法提取人内皮细胞基因组DNA，设计引物克隆EOLAl基因上游不同长度的基因片段，插 入到含荧光素酶报告基因的载体pGD．B酗ic中，经限制性内切酶酶切鉴定、测序。结果成功构建了3种含有不同长 度EOLAl上游基因的报告基因系统为EOLAl启动子的活性分析奠定了基础。 关键词： 内皮细胞高表达脂多糖相关因子l；启动子；荧光素酶报告基因 中图分类号：R394文献标识码：A文章编号：1004-7239(2008)03·0217-03 CoI坞tnlctionof化combinantof of luc№ra∞promoterreportergene f．actor1 lvsaccha—de．associated ZHOU Guang-jul，UANGZi-wenl，CHENYu2，以口Z 400038，吼i舭；2．k廖 (1．DeP州胧，lI妒眦而m研，SDm．Il嬲f月呷如以旷池弛刹肘抛n可脓舭以胁渤e聆酊，‰，研觇r 400038，傩流n) f姚矿曰￡朋s，SD以^嬲t胁印如以旷fk孤刹施胁，y胁d如耐￡，n沁巧妙，cb，研i，lg of of Toco璐tmcterecombin舳tlucifer鹊e Abs蛔ct：objective pmIImter地portergeneendothelial—overexpre8舱dlipopo． factor wouldbeusedintlle for deteminatioll．Methods 1ysacch撕de-associated1(EOLAl)，which fouowingresearchpro啪ter of toclonedifre阳nt oftlle Gen锄icDNAhumanendothelialceU w酗prepa陀d，and8pecificpdme璐we他designed len群h up． of we陀i璐ertedintotlle whichw勰thevector st陀咖m百。璐．The∞DNAfh舯ents pGD—B鹅ic lucifera∞陀ponerge舶．7rhe∞ recombin锄t wem witll dete皿i∞d nree reponergene dige8毛edr鄂tricti咖e舷yme明dthe∞quence．1t哪I协expressi∞pl鹪一 of nu呲∞ein’vithdi雎rem therec砌bin锄t mid《pGL3-EOLAl一Luc len舢《upstre枷ge