人组织激肽释放酶的生物信息学分析及其不同抗原表位的多克隆抗体的制备及纯化.pdf

蛊堕笠厶塑堡邀丛登丝酶塑生塑篮皇堂坌堑丛其不回煎厘塞位的多克隆抗体的制备及纯化第4期 doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．04．014 人组织激肽释放酶的生物信息学分析及其不同抗原表位的多克隆抗体的 制备及纯化① 冉 晓 陈 昊② 张 琴② (华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科．武汉430030) 中图分类号 R392．33文献标志码 A 文章编号10004跗X(2014)04-0491JD4 [摘要]目的：利用生物信息学分析人组织激肽释放酶(TK)，并制备针对TK不同抗原表位的多克隆抗体。方法：根 据生物信息学分析TK的结果为依据，选取针对TK不同表位的2段氨基酸序列合成多肽并与血蓝蛋白(KLH)偶联。免疫家 兔，获得多克隆抗体并纯化，分别用ELISA，SDS．PAGE染色及Westernblot等方法进行滴度，纯度，特异性及抗原表位分析。结 果：制备的抗TK多克隆抗体的纯度均为100％，其效价均在1：25600以上，具有较高的特异性并且识别不同的抗原表位。结 论：利用生物信息学软件成功地预测出TK的抗原性，并制备了针对其不同表位的多克隆抗体。 [关键词]人组织激肽释放酶；多肽；表位；多克隆抗体；纯化 Bioinformaticsoftissuekallikreinand of analysis preparation onsurfaceofan polyclonalantibodyagainstmultipleepitopes antigen RAN Medical Xiao，CHENHao，ZHANG Qin．EmergencyDepartment，TongfiHospital，Tongfi Science of and 430030，China University Technology，Wuhan tissue bioinformaticsand its mul— [Abstract]Objective：Toanalyzekallikrein(TK)by preparepolyclonalantibodyrecognizing onthesurfaceofan tothebioinformaticsand ofthe strnc— possiblehigh tipleepitopes antigen．Methods：Accordinganalysisprediction and ofTKandthe of TK of11and12amine ture，hydrophobicityantigenicity principalantibodyproject，thesyntheticpeptideconsisting toimmunize wasthen af- 1Pand fusedto used acids(112P)werekeyholelimpethemocyanin(KLH)andrabbit．Antibodypurifiedby ELISA column andtiterof antibodiesTKwereidentified andWesternblot． finity chromatography．Thespecificity polyc