弱阳离子交换毛细管整体柱的制备与蛋白质分离.pdfVIP

第37卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第3期 2009年3月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 395～398 疗g≈gAgN#eag“镪 《研究简报《 延^}写吨手^￡写屯乒^s写吨手乱2穹凿 弱阳离子交换毛细管整体柱的制备与蛋白质分离 丁明玉’ 郑睿 彭虹 (清华大学化学系，生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室，北京100084) 摘 要 以甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂，正丙醇、1，4-丁 二醇和水为致孑L剂．偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂，在0．32mm内径弹性石英毛细管内原位制备了聚合物整 0．32：0．08：0．35：0．2：0．05，在60℃反应24h，得到了孔径分布在100～300llm的大孔型整体固定相。用亚胺 基乙二酸(IDA)对整体柱进行表面改性，制备了羧酸基弱酸型阳离子交换整体固定相。优化得到的最佳改性 条件是：反应时间24h、温度75℃和pH12．0。本研究制备的一根仅5cm长的弱阳离子交换毛细管整体柱可 以在13min内分离粗卵蛋白、胰蛋白酶和溶菌酶3种模型蛋白质。 关键词 毛细管整体柱，甲基丙烯酸酯，离子交换色谱，蛋白质 1 引 言 毛细管整体柱具有制备简单、渗透性好、传质速度快、不用烧塞子和易于改性等优点，近年发展迅 速，已在毛细管电色谱和微液相色潜领域得到了广泛应用‘1。1。大量研究证明：多孔聚合物基质毛细 管整体柱比多孑L硅胶基质毛细管整体柱更适合生物大分子的分离”“o。离子交换色谱是蛋白质等离子 性生物大分子分离的首选色谱分离模式，但离子交换毛细管整体柱的制备及其增于蛋白质分离的研究 还很少。相比于强阳离子交换固定相、弱阳离子交换固定相与生物分子之间的相互作用比较温和，因而 开发了聚苯乙烯基质弱阳离子交换毛细管整体柱，均可用于蛋白质的分离。但是，目前报道的弱阳离子 交换整体柱通常采用两步法改性，即先用乙二胺处理，再用氯乙酸反应。本研究利用亚胺乙二酸进行～ 步改性，简化了合成步骤，获得了具有羧酸基团的弱阳离子交换毛细管整体柱，并考察了其对蛋白的分 离能力。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 l100HPLC mm mm 公司)；N2000色谱数据处理JH软件(浙江智达信息工程公司)；加厚0．32ID(0．69OD)弹性石 2800扫描电镜(中国科学院北京科学仪器研 英毛细管柱(河北省永年锐沣色谱器件有限公司)；KYKY IV9510汞渗透测孑L仪(美围MicromeriticsInc．公司)。 制中心)；AutoPore 成_丁业株式会社；乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA，美国AcrosOrganics公司)；正丙醇和l，4一丁二醇(北京 市化学试剂三厂)；偶氮二异丁腈(AIBN，天津福辰化学试剂厂)，使用前重结晶除杂质；弧胺乙二酸(IDA， 分析纯)、粗卵蛋白、胰蛋白酶和溶菌酶(北京世纪华林生物科技有限公司)；实验用水为二次蒸馏水。 2．2毛细管预处理 mol／L 利川水泵的负压使0．1 NaOH、水和丙酮依次通过毛细管，对毛细管内壁进行活化与清洗，然 2008-07-08收稿；2008—10-20接受 本文系国家自然科学基金(No资助项目 }E·mail：dingmy@mail．tsinghua．edu．cn 万方数据万方数据 396 分析化学 第37卷 h。然后用丙 后通入氮气吹干。将30％7一MAPS的丙酮溶液充满毛细管，密封，在60℃水浴内放置24 酮清洗毛细管，氮气吹干，备用。 2．3 整体聚合物基质的原位合成 mLGMA