极端嗜热菌Thermusthermophi省略激酶在大肠杆菌中的表达纯化及.pdfVIP

2010;30(1) 南方医科大学学报(J South Med Univ) · 1 · 极端嗜热菌Thermus thermophilus HB27 中腺苷酸激酶在大肠杆菌中的 表达 纯化及酶学性质研究 、 1 1 1 2 1 1 2 谭志文 刘 俊 张学芳 孟凡国 张耀洲 浙江理工大学生物化学研究所 浙江 杭州310018 浙江清华 ， ， ， ， （ ， ； 长三角研究院应用酶学重点实验室 浙江嘉兴314006 ， ） 摘要 目的 克隆 HB27 隆腺苷酸激酶基因并在大肠杆菌BL21 DE3 中进行表达并获得了比较高 ： Thermus thermophilus （ ） 的表达量并对其酶学性质进行分析 方法 利用PCR 技术从 HB27 基因组中扩增得到腺苷酸激酶 。 Thermus thermophilus 的基因片段 将其克隆到pET-28a 表达载体上 以PCR\ 酶切和测序进行鉴定 利用光谱分析测定该重组酶的相关酶学 ， ， 。 性质 结果 成功克隆和高效表达了腺苷酸激酶 重组酶的最适 是 最适温度是 重组酶对底物 的米氏 。 ； pH 8.5 ， 90 ℃ 。 ADP 常数 是 ADP 为 -1 -1 将该重组酶在 下分别作用 后 发现仍具 Km 68.6 mol/L,V 0.294 mmol/(L min ) 70 80 90 100 7 h μ max · 。 、 、 、 ℃ ， 有酶活性 显示出高的温度耐受性 腺苷酸激酶的特异性抑制剂AP5A 浓度为2.0 mmol/L 能够抑制重组腺苷酸激酶 ， 。 70% 的酶活性 AP5A 对重组腺苷酸激酶的抑制类型为竞争性抑制 其抑制常数为46.39 mol/L 结论 成功克隆 表达 ， ， μ 。