毛尖紫萼藓总RNA的提取方法研究.pdfVIP

武汉植物学研究2007，25(3)：310—312 JournM ofWuhanBotanicalResearch 毛尖紫萼藓总 RNA的提取方法研究 沙伟，王艳丽，滕兆岩 (齐齐哈尔大学生命科学与工程学院，黑龙江齐齐哈尔 161006) 摘 要：介绍一种提取苔藓植物毛尖紫萼藓 (Gr／mma／pilfieraP．Beauv)总 RNA的方法。以新鲜的紫萼藓为材料， 采用改良的SDS的方法，以氯化锂为沉淀试剂，成功地提取了该植物的总RNA。并与其他方法作了对比，结果发现 该方法获得的RNA条带清晰、完整性好、纯度高、DNA污染小。可满足反转录及 RT-PCR等实验要求。 关键词：毛尖紫萼藓；SDS；总RNA；RT-PCR 中图分类号：Q752；Q949．35 文献标识码：A 文章编号：1000-470X(2007)03-0310-03 TheM ethodStudyofExtractingTotalRNA from GrimmiapiliferaP．Beauv SHA Wei。WANGYan．Li。I’ENGZhao．Yah (Collegeof Sce／nceandEn ，l。而lg， g Un矗 ，Qiq~har，Heilong~iang 161006，China) Abstract：Amethod ofextractingtotalRNAfromGrimmiapilfieraP．Beauvofmosswasintroducted．The freshGrimmiapilfierawasusedasthemainmaterials．Th eimprovedSDSmehtodWas implied，andhte reagentofRNA precipitationwasLiCI．Th etotalRNA were successfully isolatedfrom thisplant．Athte sanletime。htemehtod Wascomparedwihtohter8。itcouldbefindhtathtetotalRNA0fG．pilfieraextracted bythemehtod hadclearbnads，goodcompleteness，high purlt)rnad lessDNA conatmination．Thetotal RNA iSsuitableforReverseTranscription．RT．PCR． Keywords：GrimmiapilfieraP．Beauv；SDS；TotalRNA；RT_PCR RNA是分子生物学研究的重要对象之一，高质 PCR等实验要求，为深人开展苔藓植物抗旱基因筛 量的 RNA是进 行反转录、RT—PCR、DDRT-PCR、 选任务奠定了基础。 Northern杂交分析、cDNA文库构建等的重要前提。 1 材料与方法 因此，在对苔藓植物进行mRNA差异显示筛选抗旱 基因的过程中，高质量的总RNA的提取至关重要。 1．1 实验材料 常用 的提取总 RNA 的方法有 SDS法…、CTAB 毛尖紫萼藓 (GrimmiapHfieraP．Beauv)是紫萼 法 r、异硫氰酸胍法 、苯酚法H】、氯化锂沉淀法[】 藓科(Grimmiaceae)一种旱生性藓类植物 。本材料 等。但 由于藓类植物普遍含有萜类、固醇类、酚类等 采于五大连池石面上 ，选取长势较好的进行培养，待 次生代谢产物而影响RNA提取。研究显示，萜类化 其恢复生长，选取一定量 自然生长的材料 ，保存于 合物会造成RNA的化学降解和酶解，而藓类中经常 一 8O℃冰箱中待用。 含有的黄酮醇类物质也是影响RNA提取的物质，使 试剂：SDS提取液(O．18moL／LTris，0．09m