小鼠精原干细胞冷冻保存.pdfVIP

第 40 卷 　第 4 期 解 　剖 　学 　报 Vol40 ,No4 2009 年 8 月 ACTA ANATOMICA SINICA Aug. 2009 ·6　　85 · 小鼠精原干细胞冷冻保存 1 1 1 1 1 2 1 丁晓麟 　张寒莹 　王子玉 　张艳丽 　许欣 　石国庆 　王锋 ( 1 南京农业大学动物胚胎工程技术中心 , 南京 　210095 ;2 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所 , 石河子 　832000) ( ) 　　[摘要] 　目的　探索小鼠精原干细胞 SSCs 冷冻保存方法以及解冻后体外快速增殖的条件 。　方法 　实验以 6d 龄雄性昆明小白鼠为材料 ,两步酶消化法分离小鼠睾丸生殖细胞 ,Percoll 非连续密度梯度离心法富集小鼠精原 α 干细胞 ,随后加入不同的冷冻液以及采用不同的降温速率冷冻小鼠精原干细胞 。以MEM 为基本培养基 ,加入 μ 10 %胎牛血清和 100 gL 的胶质细胞源性神经营养因子 , WST8 比色法分析培养 SSCs 复苏后的增殖率 ,运用碱性 磷酸酶细胞化学染色和 RTPCR 技术 ,对培养的 SSCs 进行鉴定 。　结果 　冷冻液中添加 10 %二甲基亚砜 、10 %胎 牛血清 、007molL 蔗糖时 , 以 1 ℃min 程控降温方式冷冻小鼠 SSCs ,细胞解冻后活率最高 ,达 84 % 以上 ;采用非程控 降温方式冻存 SSCs ,尽管细胞解冻后活率相对于程控降温方式略低 ,但具有方法简单 、易于操作 、无需昂贵仪器的 优点 ,复苏后 SSCs 贴壁时间为 8～12h ,24h 可见细胞分裂 ,48h 细胞出现迅速增殖 ,96h 可见较多含 20～25 细胞的细 胞团 ,此时精原干细胞增殖近 5 倍 。　结论 　本实验所用培养条件 ,可以使经长期冷冻的 SSCs 短期快速增殖 。 [ 关键词] 　冷冻保护剂 ; 降温速率 ;细胞培养 ;精原干细胞 ;小鼠 [ 中图分类号] 　Q785 　[文献标志码] 　A 　[DOI] 　10 . 3969j . issn .. 2009 . 04 . 033 Cryopreservation of mouse spermatogonial stem cells 1 1 1 1 1 2 1 DIN G Xiaolin , ZHAN G Hanying , WAN G Ziyu , ZHAN G Yanli , XU Xin , SHI Guoqing , WAN G Feng ( 1 Center of A nimal Embry o Engineering and Technology , N anj ing Agricultural University , N an