基于PCRcDNA基因克隆技术研究进展.docVIP

基于PCR的cDNA基因克隆技术研究进展 蔡欣1 陈宏2, 3 汪虹英4 (1.西北农林科技大学生命科学院，陕西省农业分子生物学重点实验室, 杨凌 712100; 2. 西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室, 杨凌 712100; 3. 徐州师范大学生物技术研究所, 徐州221116; 4. 甘肃省漳县一中, 甘肃漳县 748300) 摘要 RT-PCR、single-sided(anchored) PCR、RACE以及step out RACE、DDRT-PCR、cDNA RDA、SSH等都是建立在PCR基础之上的cDNA分子克隆技术，本文介绍各种技术的优缺点、应用以及与同类技术进行比较，这些技术现在已经成功应用于大量EST的分离、cDNA文库的构建、编码产物未知的差别表达基因的分离以及全长cDNA基因序列的克隆等方面。 关键词cDNA基因克隆; PCR; 特点；应用 中图分类号:Q7 Research Progress on PCR-based Techniques of cDNA Gene Cloning CAI Xin1 CHEN Hong2, 3 WANG Hong-ying4 (1College of Life Science, Northwest Sci-tech University of Agriculture and Forestry, Shaanxi Key Laboratory of Agriculture Molecular Biology, Yangling, Shaanxi 712100 China; 2 College of Animal Science and Technology, Northwest Sci-tech University of Agriculture and Forestry, Shaanxi Key Laboratory of Agriculture Molecular Biology, Yangling, Shaanxi 712100,China; 3. Institute of Biotechnology, Xuzhou Normal University, Xuzhou, Jiangsu 221116,China; 4 the First Middle School of Zhangxian County, Zhangxian, Gansu 748300,China) Abstract: RT-PCR, single-sided(anchored) PCR, RACE, step out RACE, DDRT-PCR, cDNA RDA and SSH are all the techniques of cDNA cloning based on PCR. The advantages and disadvantages of each technique were dicussed and compared with those of their counterparts. These techniques are now successfully used in the fields of isolation of numerous ESTs, construction of cDNA libraries, obtaining of differentially expressed new genes and cloning of cDNA in full length. Keywords: cDNA gene cloning; PCR; characteristics; applications Kary Mullis等在1983年发明的PCR技术[1]现在已经成为分子生物学及其相关领域的经典实验方法，目前由PCR技术衍生出许多重要的相关技术，它们在基因克隆、基因测序、基因检测、基因改造以及突变分析等分子生物学以及其它生命科学研究中具有重要的应用价值；目前有许多cDNA基因克隆方法主要是建立于PCR及其衍生技术之上的，原有技术被不断改进、新的技术被不断发明，它们在cDNA文库的构建、EST的分离、cDNA基因克隆、新基因的分离、基因表达的检测分析等研究领域发挥着重要的作用。 RT-PCR 当我们期望从某一序列已知的mRNA克隆cDNA时，就可以利用RT-PCR(reverse transcription PCR)，即逆转录PCR方法,其原理是由mRNA通过逆转录反应产生的DNA链作为模板进行常规PCR扩增[2]。由于RT-PCR的放大作用和很高的敏感性，所