解磷菌的筛选及生态特性研究.pdfVIP

Research on screening of phosphate-solubilizing bacteria and their ecological characteristics Supervisor:Prof.Li Zhuo-jia Prof.Wu Yin Master Candidate:Hu Bai-wen DALIAN ACEAN UNIVERSITY DALIAN,LIAONING PROVINCE,P.R.CHINA II 摘要 摘 要 磷元素是养殖池塘浮游植物生长的必需基础元素。在养殖池塘系统中，存在沉积物总 磷含量高，水体活性磷含量低，磷的总体利用率不高的问题。解磷菌可将沉积物中的难溶 性磷转化为可供浮游植物利用的活性磷，但养殖池塘中解磷菌数量少，能否通过外源添加 解磷菌提高磷的利用率成为关注点。本研究筛选高效解磷菌株，研究目的菌株对不同温度、 盐度、初始pH 范围的适应性，进而研究解磷菌株对饲料及模拟池塘环境的释磷效果，为 解磷菌在养殖池塘中的应用提供技术支持。主要研究内容如下： 通过固体平板初筛和液体摇瓶复筛，从养殖池塘底泥、实验室保存菌种及购买菌种中 筛选出解磷效果较好的菌株，采用16S rDNA 序列分析和Biolog 鉴定法对菌株进行鉴定。 结果从养殖池塘底泥中共筛选到四株解磷效果较好的菌株，编号为HY-3、HY-4 、HY-5 和 HY-6，5 d 摇瓶培养的解磷量分别为56.85 mg/L、64.67 mg/L、27.88 mg/L 和48.34 mg/L 。 经16S rDNA 序列分析和Biolog 生化鉴定，菌株HY-3 和HY-6 为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens ），菌株HY-4 为饲料类芽孢杆菌（Paenibacillus pabuli ），菌株HY-5 为 地衣芽孢杆菌（Baciilus licheniformis ）。 针对池塘养殖环境条件，研究了菌株HY-3 和HY-6 对不同温度、盐度和初始pH 的适 应性。结果发现，菌株HY-3 具有较广的温度和盐度的适应范围，在 15～35℃，pH 6～8 和盐度10～40 的条件下生长良好，在 25～35℃，pH 6～8，盐度10～40 的条件下具有较 好的解磷效果，120 h 解磷量最高可达64.53 mg/L 。菌株HY-6 有较广的温度和盐度的适应 范围，在15～35℃，pH6～8，盐度0～40 的条件下生长良好，在 25～35℃，pH 6～7，盐 度0～40 的条件下具有较好的解磷效果，120 h 解磷量最高可达75.33 mg/L 。结果表明，菌 株HY-3 适用于海水养殖池塘，菌株HY-6 适用于淡水和海水养殖池塘。 研究了菌株HY-3 和 HY-6 的生长特性和最高解磷量。结果发现，在有机磷液体培养 9 基中，两株菌的菌量均可达 10 cfu/mL 以上，且稳定期较长。菌株HY-3 在培养的第9 d 达到最高解磷量，在盐度为 10 的条件下最高解磷量为118.92 mg/L ，盐度为40 的条件下最 高解磷量为105.14 mg/L，且盐度为10 条件下培养液中活性磷含量的降低幅度比盐度为40 条件下更缓慢。菌株HY-6 在培养的第9 d 也达到最高解磷量，在盐度为 10 的条件下最高 解磷量为116.52 mg/L ，盐度为20 的条件下最高解磷量为126.29 mg/L。 根据养殖池塘pH 的变化范围以及在初始pH 适应范围研究发现的初始pH 8 和pH 9 解磷效果差别较大的问题，细化研究了菌株HY-3 和HY-6 在初始pH 8.0～9.0 之间的生长 和解磷变化规律。结果发现，菌株HY-3 和HY-6 在初始pH 不高于8.5 时均可较好生长， 8 菌量可达10 cfu/m