TaNHX,2_基因表达载体、Na_+__H_+_反向运转蛋白RNAi载体构建及功能分析.pdfVIP

及功能研究 原江锋 摘要：植物在生长发育中时常要受到不良环境的胁迫，如盐渍、干旱、低温 等。其中盐胁迫严重影响植物的生长。为了减少盐胁迫造成的伤害，植物在长期 进化过程中，形成了一套耐盐的机制，或增加Na+的外排，或限制Na+的吸收，或将 Na+束缚在液泡中。目前已经知道有些植物主要通过液泡膜Na+／}I+反向运转蛋白将 Na+束缚在液泡中以减少Na+的毒害。因此液泡膜Nd／H+反向运转蛋白在植物耐盐性 方面具有重要作用。在耕地有限，人口不断增长的今天，培育耐盐能力相对提高 的植物品种已成为植物分子育种工程的目标之一。 所以本课题以小麦中TaNHX2为研究对象，构建了含有TaNHX2基因的植物表达 载体。构建Na+／H+反向运转蛋白基因的RNA干涉表达载体。采用花粉管通道法成 功的获得了转基因拟南芥，并进行了相关的分子生物学鉴定及生理验证。为植物 耐逆研究积累相关资料，主要试验方法和结论如下： 1．以植物双元载体pBIN438为基本元件，构建含TaNHX2基因的植物表达载体。 利用花粉管通道法将TaNHX2基因导入拟南芥，并获得转基因植株。通过PCR、 Southern杂交和R．T—PCR鉴定，表明外源基因已经成功