一株保加利亚乳杆菌LB5高密度发酵及其冻干工艺研究.pdf

摘 要 试验以一株具有优良发酵特性的保加利亚乳杆菌 LB5 为研究对象，通过对其 培养基、培养条件、高密度发酵工艺、离心及冻干进行研究，确定保加利亚乳杆 菌冻干发酵剂制备工艺参数、技术路线，为保加利亚乳杆菌LB5 的工业化生产提 供依据。 本试验探讨了碳源、氮源、增菌因子、缓冲盐类对保加利亚乳杆菌 LB5 菌体 密度影响;然后应用正交助手软件以及 DPS 软件，采用 design-expert 设计种的 响应面设计对 LB5 的发酵培养基中重要因子进行优化。最终确定 LB5 最佳培养基 的配方为：葡萄糖 16.5g/L,大豆蛋白胨 24g/L ， 酪蛋白胨 5g/L ， 酵母浸粉 16g/L，柠檬酸 3.3g/L ，柠檬酸钠 4.08g/L 最佳的增菌因子为番茄汁 1%、胡萝 卜汁3% 、碳酸钙 0.08% 。通过验证试验可以证明优化后菌体密度提高到 1.4×109 CFU/mL。 在培养基优化的基础之上，同时对 LB5 的培养条件进行优化，包括接种量、 温度、初始 pH 等，通过试验确定为：采用 5%的添加量，初始pH 为 7，42℃培养 温度，LB5 的菌体密度最大，菌体 OD 可达到 6.4。 采用上海镇江全自动发酵罐对LB5 发酵，分别进行了温度、中和剂及补糖 的试验，结果表明：选择 50 转/min，中和剂为碳酸钠，最终选择 30g/L 的流加 葡萄糖，恒定 pH 选择 6，发酵温度采用前期 42℃和后期 35℃培养发酵工艺优化 9 后 LB5 的活菌数达到2.7×10 CFU/mL。 以离心收得率为衡量指标，通过设置不同离心时间和离心转数，确定了 LB5 离心收集菌体的最佳离心条件：离心转数为 7000 转/min，离心时间为 15min 并 对 LB5 冷冻干燥工艺进行优化。 以 OD、活菌数、存活率为指标确定了菌粉的冷冻厚度为 0.75cm，干燥时间 为 14h， 冷冻参数为-70℃，2h，最终选择保护剂配方为葡萄糖 1%、脱脂乳 3%、 麦芽糊精 3%、维生素 c 0.05%、谷氨酸钠为 3%。 冻干过程中采用预培养方式可以提高菌体活力，预培养温度为 20℃，1h 的 条件为最佳条件。 最终将优化后的LB5 与优化前的对比，LB5 发酵液的活菌数最终达到3.6×1010 CFU/mL。 关键词：保加利亚乳杆菌；高密度发酵；优化；离心；冷冻干燥 Studies on high cell Density Culture and freeze-drying processing of Lactobacillus Bulgaricus LB5 Abstract In this text, LB5 which have good characteristic of fermentation is as representative Lactobacillus bulgaricus strain, and conducted with the study on medium optimization, high cell density culture and freeze-dried protection. The result that the technical process and technics parameter of the freeze-dried lacic acid bacteria were established which provided the datas for industrialization of freeze -dried Lactobacillus bulgaricus. In the first optimization step, the effect of glucose, peptone, beef extract, yeast extract, Kammoniumcit