2014年甘肃省永昌县第一中学高一生物课件：《DNA的粗提取与鉴定》（新人教版必修2）.pptVIP

DNA的粗提取和鉴定 实验九 一、实验原理: 2.DNA的提纯 DNA溶解度 NaCl浓度 0.14 mol/L 1.DNA的粗提取 DNA在0.14MNaCl溶液中溶解度最低 DNA不溶解于酒精，冷却的95%酒精溶解杂质，进一步提纯DNA 3.DNA鉴定原理 DNA + 二苯胺 蓝色 沸水浴 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 （三）除去滤液中的杂质(纯化) （四） DNA的析出与鉴定 二、实验设计: （一）实验材料的选取 从下列材料中选取2～3种 原则： 菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜； 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌 凡是含有DNA的生物材料都可以考虑 选用DNA含量相对较高的组织 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。 哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。 液体培养基中的大肠杆菌的DNA量减少。 鱼卵是减数分裂的产物。 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞 2、植物细胞 ——容易破碎 ——需要溶解细胞膜 鸡血细胞溶液： 加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液 想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂； 加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出DNA ① 加入一定的洗涤剂和食盐 ② 充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中 经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的DNA释放。若研磨不充分，会使提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 1. DNA的溶解性 2. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 （三）除去滤液中的杂质 （四） DNA的析出与鉴定 与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)， 静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物 ——粗提取DNA 用玻璃棒沿一个方向搅拌， 卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水 1、DNA的析出 2. DNA的鉴定 ⑴ 向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl 溶液5ml ⑵ 其中一支试管中加入DNA丝状物 ⑶ 各加入二苯胺试剂4ml ⑷ 混匀后，置于沸水浴中加热5min ⑸ 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象： 溶解丝状物的溶液变为蓝色 试剂： 条件： 二苯胺 蓝色 沸水浴 显色： 1、该实验的基本步骤有： (1)提取细胞核：在血细胞悬浮液中加入蒸馏 水．充分搅拌5分钟，再进行过滤。 加蒸馏水的目的是___________ 搅拌的目的是_____________ (２)溶解核DNA：NaCl浓度为_________ (3)析出DNA：加入蒸馏水，其目的是________________，用玻璃棒搅拌，此时有絮状物(黄色)出现，直到不再增多，絮状物的主要成分是________________。? (4)滤取DNA：用多层纱布过滤(3)中的溶液，含有DNA的粘稠物留在__________上。 课堂练习 (5)黏稠物DNA再溶解：将黏稠物至于____中再溶解(6)提取杂质较少的DNA：这时用冷的_______并搅拌出现丝状物，呈____色，用玻璃棒卷起丝状物，主要成分是______________________________(7)DNA的鉴定：这一步要对照，将丝状物用________________再溶解，用____________试剂在_________条件下5分钟，冷却后观察到____色。? 课堂练习