电针内关穴对大鼠心肌缺血再灌注心肌组织NO、NOS和细胞内钙的影响.pdfVIP

2010年湖南省针灸学会学术年会 1．4电针刺激参数与穴位定位 输出电流2～4mA)。负极接穴位，正极接鼠尾。穴位进针深度3mm左右，以前肢出现 轻微颤动为度。“内关”、“合谷”穴定位参照林文注、王佩主编《实验针灸学》【IoJ。内关： 前肢内侧、离腕关节约3mm左右的尺桡骨缝间。合谷：前肢第一、第二掌骨之间。列 缺：采用拟人比照法定位。 1．5检测方法 1．5．1匀浆液的制备：摘取心脏，置于冰冷的生理盐水冲洗，除去血液，滤纸拭干，分 析天平称取心尖部缺血区域0．29心肌组织，放入小烧杯内，用刻度吸管加入组织块重量 9倍的生理盐水，将眼科剪剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，置于匀浆机上，捣杆垂直插 常温离心15分钟。 1．5．2 氮及一氧化氮合酶试剂盒检测步骤，用754紫外分光光度计测定NO、NOS活性；以硝 酸还原酶比色法测定其组织蛋白含量。 1．5．3 细胞悬液的制备：实验完成后，摘取心脏，取结扎下方左心室肌部分组织0．39， 磷酸缓冲液(PBS)冲洗，置小烧杯内用眼科剪剪碎组织，加入胶原酶37℃消化，磁力 搅拌器搅拌，用眼科镊在不锈钢网上将组织细胞分离，用尼仑网过滤，PBS漂洗并悬液 细胞，调整细胞浓度为106个／ml，漩涡混匀器充分混匀悬液。 1．5．4 Ca2+的检测：将制备好的心肌细胞悬液预热，微量加样器加入Fluo．3／AM荧光染 针孔1．0(该检测由Il|东中医药大学基础学院中心实验室完成)。 1．6数据统计方法 用SPSSl1．0统计软件进行统计学分析，所得数据以均值士标准差(X±s)表示。组 间差异用单因素方差分析，组问比较用LSD法，P0．05为差异有统计学意义。 2结果 2．1 电针内关穴对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MI对)组织NO及NOS的影响。 图l显示，模型组(n-10)心肌组织NO含量与假手术组(n：6)比较有所降低， 但经统计学处理无显著性差异(PO．05)，可能与假手术组开胸创伤的应激反应及样本 计学差异(P0．05)：电针内关，列缺，合谷三穴组问比较(见图1)，见电针内关组心 肌组织NO明显高于电针列缺组(P0．05)，而电针内关组与电针合谷组比较虽也有差 异，但无统计学意义(PO．05)。与此同时由图2可见，模型组与假手术组比较心肌组 41 2010年湖南省针灸学会学术年会 性显著提高(P0．01)。电针列缺组和电针合谷组与模型组比较心肌组织NOS活性虽 也有所升高，但差异无显著性意义(P0．05)；电针内关，列缺，合谷三穴组间比较， (见图2)，见电针内关组NOS活性显著高于电针列缺组与电针合谷组(P值均O．01)， 而电针列缺与电针合谷二组间比较未见明显差异(P0．05)；由此表明电针内关穴组在 使心肌组织NO含量增高的同时，NOS的活性也随之增强。 芑 500 △ 誓400 O 萋300 =200 C 售100 o 0 zO 假手术组模型组 内关组 列缺组 合谷组 图l 电针内关对心肌组织NO含量比较 注：※P0．05与模型组比较；△P0．05与列缺组比较。 曼500 ∞ 工 姜400工 ■ O I工I 工 E 300 工 j ：：：： ： 。： = 200 ：．； C ；：j i?j’ 售 100