IL-10通过P38MAPK信号通路介导IL-1β对肺成纤维细胞ICAM-1的表达.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………3 研究论文IL．10通过P38 MAPK信号通路介导IL．1p对肺成纤维细胞 ICAM．1的表达 前言……………………………………………………………………66月¨吾…………………………………………………………………… 材料与方法………………………………．…………………………．．7 结果……………………………………………………………………17 附图……………………………………………………………………18 附表……………………………………………………………………19 讨论……………………………………………………………………20 结论……………………………………………………………………24 参考文献………………………………………………………………24 综述 白细胞介素一10与呼吸系统疾病……………………………．30 参考文献………………………………………………………．．38 致谢…………………………………………………………………………46 个人简历……………………………………………………………………47 中文摘要 IL—10通过P38MAPK信号通路介导IL一1 p对肺成纤维细胞 ICAM．1的表达 中文摘要 目的：本研究以大鼠胚肺成纤维细胞为研究对象，通过对其ICAM．1 了解肺纤维化的部分发病机制，为临床治疗新思路提供依据。 方法：采用组织切块培养技术对Wistar鼠胚肺成纤维细胞进行培养： 将临产Wistar孕鼠吸入乙醚麻醉后，立刻取出胎鼠，将胎鼠肺组织取出 培养条件：恒温37℃，95％空气及5％C02混合气体，湿度饱和，培养4 至6小时，一周左右后开始传代，至5-6代后待所培养的肺成纤维细胞贴 壁生长且结构特征、外部形态及生长状态基本一致遂进行下一步实验。 玻片(已消毒)的6孔板中进行接种；之后置于细胞培养箱中孵育至达到 细胞80％．100％融合，弃掉原培养液并加入新培养液(不含胎牛血清)， 进一步培养12小时，待GO期细胞基本同步化时，将实验细胞分为三组， 每组6复孔。分组情况：(1)对照组：单纯加入DMEM培养液培养鼠胚肺 10ng／ml及IL．11315ng／ml共同刺激肺成纤维细胞6小时。 Blot法检测肺成纤维细胞P38MAPK磷酸化水平。 结果： 1对Wistar胎鼠的原代肺成纤维细胞培养成功 实验以组织切块培养法进行Wistar胎鼠的肺成纤维细胞培养，最后 得到比较理想的生长状况较好的肺成纤维细胞实验模型，其细胞间形态较 为一致，胞质均匀，胞体丰满，核仁及核分裂相清晰可见。 2RT-PCR法对肺成纤维细胞中ICAM。1 mRNA表达水平的测定 中文摘要 ICAM．1mRNA电泳条带的光密度扫描显示：对照组的肺成纤维细胞 中ICAM．1mRNA有一定量的基础表达，但其表达量较低，为 (O．848+0．039)，与对照组相比明显升高(氏O．01)； IL．10+IL．113联合 干预组ICAM．1 组的表达量(氏0．01)，但与对照组相比其表达量有所升高(尸O．01)。 3WesternBlot法测定肺成纤维细胞P．P38蛋白表达水平的变化 磷酸化P38(P．P38)蛋白在肺成纤维细胞中存在基础表达，对照组为 明显低于IL．1 13干预组俨O．01)，但高于对照组，具有统计学意义俨O．01)。 结论： 1正常的肺成纤维细胞中ICAM．1表达量较低； 2IL．1p可以上调肺成纤维细胞ICAM．1