分光光度法测定茯苓中多糖的含量.docVIP

分光光度法测定茯苓中多糖的含量[导读] 茯苓多糖的提取纯化 取新鲜茯苓，去表皮，切块，干燥，粉碎，过60目筛得茯苓粉末熊婧1?? 於小波2（1 武汉健民药业集团股份有限公司? 湖北武汉? 430052）（2 马应龙药业集团股份有限公司? 湖北武汉? 430064）【摘要】目的? 建立茯苓中多糖的含量测定方法，分析不同产地和不同菌种培育茯苓中的多糖含量，为茯苓药材质量控制和评价提供参考。方法? 采用分光光度法，苯酚-硫酸法显色，检测波长490nm。结果? 葡萄糖在40～200μg/ml范围内线性良好，r=0.9999，平均回收率为99.72%，RSD为0.99%（n=6）。不同产地和不同菌种培育茯苓中的多糖含量差异较大。结论? 本方法简便快速、准确可靠、重复性好，可用于茯苓药材的质量控制。【关键词】分光光度法? 茯苓? 茯苓多糖? 含量测定【中图分类号】R927.2?????????????????????? 【文献标识码】B?????????????????????????????? 【文章编号】2095-1752（2012）18-0310-02??????? 茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf的干燥菌核，具利水渗湿、健脾、宁心之功效，主要用于水肿尿少、痰饮眩悸、脾虚食少、便溏泄泻、心神不安、惊悸失眠等症[1]。研究表明，茯苓中含有多糖类、萜类、甾体类、蛋白质等多种化合物，其中，多糖类化合物在该药材中含量甚高，具有抗炎症、抗氧化损伤和免疫调节等多个方面的生物活性，一直备受各国研究者的重视[2]。在现行《中国药典》2010年版一部茯苓药材标准中，尚无含量控制指标，故笔者采用分光光度法建立茯苓多糖含量测定方法，为茯苓药材质量控制和评价提供参考。??????? 1? 仪器与试药??????? 1.1 仪器? SHIMADZU UV-2041PC紫外-可见分光光度计，METTLER TOLEDO AL204型电子天平（万分之一），电子控温水浴锅等。??????? 1.2 试药? 茯苓样品分别采自湖北、安徽、云南等20个省区及28个不同菌种培育的茯苓药材，经湖北省中医药研究院王克勤教授鉴定为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf；浓硫酸、苯酚（分析纯）、葡萄糖标准品（购于中国食品药品检定研究院，原中国药品生物制品检定所）、水（重蒸馏水）；其他试剂均为分析纯。??????? 2? 方法与结果??????? 2.1? 茯苓多糖的提取纯化? 取新鲜茯苓，去表皮，切块，干燥，粉碎，过60目筛得茯苓粉末。取茯苓粉末约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加25ml石油醚于70水浴中回流2h，冷却，过滤，滤渣干燥后加0.1mol/LNaOH溶液100ml，搅拌1h（＜5)，以3500r/min离心15 min，取上清液。上清夜用10%冰醋酸溶液调pH值5～6，使其成糊状，离心，弃上清夜，残留物置透析袋中，用蒸馏水洗涤12h，离心得白色胶状沉淀，即为茯苓多糖。??????? 2.2? 供试品溶液的制备? 取茯苓样品按2.1项下方法制得茯苓多糖，将其置200ml量瓶中，加水溶解至刻度，缓慢搅匀，精密量取0.5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，即得。??????? 2.3? 对照品溶液的制备? 取葡萄糖标准品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含200μg的溶液，作为贮备液，即得。??????? 2.4? 测定法? 取对照品或供试品溶液1.0ml，加入5%苯酚溶液1.75ml，摇匀，缓慢加入浓硫酸6.0ml，迅速摇匀，室温放置40min，在紫外-可见分光光度计490nm的波长处测定吸光度。??????? 2.5? 线性关系考察? 分别精密量取40、80、120、160、200μg/ml的对照品溶液2.0ml，按2.4项下测定法测定吸光度，以浓度（C）对吸光度（A）进行线性回归，得回归方程为A=0.0044C +0.0256（r=0.9999），葡萄糖在40～200μg/ml范围内线性良好。??????? 2.6? 精密度试验? 精密量取对照品溶液1.0ml，按2.4项下测定法测定吸光度5次，吸光度依次为0.439、0.437、0.437、0.438、0.438，RSD=0.19%（n=5），表明仪器精密度良好。??????? 2.7? 稳定性试验? 精密量取供试品溶液1.0ml，于0、1、2、4、8、24h，按2.4项下测定法测定吸光度，吸光度依次为0.437、0.438、0.439、0.439、0.439、0.441，RSD=0.31%（n=6），表明供试品溶液在24h内稳定性良好。??????? 2.8? 重复性试验? 精密量取供试品溶液各1.0ml，