罗非鱼组织内无乳链球菌实时荧光定量PCR检测方法建立文献资料.pdfVIP

第 11卷第3期 南 方 水 产 科 学 Vo1．11，No．3 2015年 6月 SouthChinaFisheriesScience Jun．，2015 doi：10．3969／j．issn．2095—0780．2015．03．007 罗非鱼组织 内无乳链球菌实时荧光定量 PCR检测方法建立 王 瑞，李莉萍，黄 婷，梁万文，梁 聪，雷爱莹，陈 明 (广西水产科学研究院，广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室，广西南宁530021) 摘要：为建立一种罗非鱼组织内无乳链球菌 (Streptococcusagalactiae)的定量检测方法 ，以无乳链球菌 基因为 靶标建立了TaqMan荧光探针实时定量 PCR方法，并对该方法的特异性、敏感性及实用性进行了验证。应用建 立的方法检测无乳链球菌标准菌株和阳性菌株均为阳性，阴性对照菌株均为阴性 ；无乳链球菌基因组 DNA最低 检测质量浓度为3．42×10一ng·txL～，每个反应体系检测下限低于 10个细胞 ；人工感染罗非鱼肝 、脾 、中肠和 肾组织样品无乳链球菌检测结果均为阳性 ，组织样品每微克 DNA可检测到无乳链球菌细胞数量分别为2．95× 10个 、2．45×10 个、2．34×10 个和4．54×10 个，对照组为阴性。结果表明建立的罗非鱼组织内无乳链球菌 实时荧光定量PCR检测方法具有准确性高、特异性和敏感性强等特点，可对罗非鱼组织内无乳链球菌进行快速 定量检测，可用于罗非鱼无乳链球菌病的监测与预防。 关键词：罗非鱼 ；无乳链球菌；实时荧光定量 PCR；TaqMan荧光探针 中图分类号 ：S943．125 文献标志码：A 文章编号：2095—0780一(2015)03—0041—06 Real-timequantitativePCR fordetection ofStreptococcus agalactiaefrom tilapiatissue WANG Rui，LILiping，HUANG Ting，LIANGWanwen，LIANG Cong，LEIAiying，CHEN Ming (GuangxiKeyLab．forAquaticGeneticBreedingandHealthyAquaculture，Guangxi AcademyofFisherySciences，Nanning530021，China) Abstract：Bydesigningprimersandprobebasedontheconservedregionof geneofStreptococcus agalactiaeisolatedfrom tilapia， wedevelopedareal—timefluorescentPCR assayfordetectionofS．agalactiaefrom tilapiatissueandverifiedthespecificity，sensitivity andpracticabilityoftheassay．ThestandardandpositivestrainsofS．agalactiaewerepositive．andaIJnegativecontrolswerenegative． Theminimum detectableconcentrationofS．agalactiaegenomeDNA was3．42 ×10～ ng·LLL～ ，andthedetectionlimitoftheassay waslessthan 10ceilsperreactionsystem．ThegenomeDNA samplesofmidgut，liver，spleenandkidneywhichwerecollectedrfom tilapiaartificiallyinfectedwithS．agalactiaeweretestedbyreal—ti