大鼠背根神经节神经元上失活BK通道特性的研究.pdfVIP

维普资讯 · 408 · 生物化学与生物物理进展 Prog．Biochem．Biophy~ 2005；32(5) 大鼠背根神经节神经元上失活 BK通道特性的研究木 李 伟 ·万 有 韩济生 丁久平)徐 涛 卜‘ ()华‘中科技大学生命科学与技术学院生物物理与生物化学研究所，武汉 430074 北京大学医学部神经科学研究所，北京 100083) 摘要 大电导的电压和Ca2+激活的l(+通道 (BK通道)在哺乳动物的组织中广泛表达，起着多种多样的作用．目前 只有少数组织中BK通道的性质被深入地研究，而且鲜见有失活的BK通道03IQ 的报道，尤其是在神经元中．发 现在大鼠小直径的背根神经节 (DRG)神经元中，普遍存在失活的BK通道．失活的BK电流成分是 Ca2．敏感的， 可以被大电导的BK通道特异阻断剂ChTX所阻断，而且木瓜蛋白酶可以从胞外改变通道失活的特性． 关键词 背根神经节，BK通道 ，失活 学科分类号 Q424 大电导的电压和钙激活的钾通道 (BK通道)在 (papain，twicecrystallized：Simg a，catno．P3125) 膜去极化或胞内Ca2+升高时通道的活性增加，抑 使用浓度为 16U／ml，用正常外液稀释 ，加入 制了由于胞内Ca斗浓度升高和 ／或膜去极化所引起 5mmol／LL—cysteine激活．在外液中加入 10mmol／L 的兴奋性事件．在轴突末梢，BK通道和电压依赖 4一aminopyridine(4一AP)以阻断电压依赖的 通道 的Ca2+通道耦联，因此，在调节神经递质释放方面 (Kv)t．Charybdotoxin(ChTX，Simga，catno．C7802) 起着重要作用．尽管BK通道在各种组织和细胞中 配制成 50i~mol／L的储液 ，加入 0．5％(质量体积 广泛存在 【，但是却很少展现失活的性质，尤其 比)牛血清 白蛋白 (bovnieserumalbumni，BSA)防 是在神经元中． 止非特异性的结合，使用前用正常外液稀释至 背根神经节 (dorsalrootganglia，DRG)从外周 100mu ol／L． 组织传递躯体和内脏的感觉信息到脊髓9[】，中小直 1．2 DRG单细胞的分离 径的DRG神经元胞体和轴突主要传递疼痛和温度 取3～5周的雄性 Wistar大鼠，迅速断头处死， 信息，而大直径的神经元主要传递机械性刺激的信 从脊椎外将两侧 L4，L5和 L6神经节连同附着的 息．先前DRG神经元上BK通道的研究主要是关于 神经一同取出，置于预先冰孵的DMEM外液中， BK通道对动作 电位的影响，激活BK通道使DRG 在解剖镜下用虹膜剪仔细剪净神经节附着的背根和 神经元动作电位的时程(actionpotentialduration， 腹根神经后，将神经节剪碎．将神经节转移到37℃ APD)缩短，动作电位的爆发频率(firingfrequency) 预孵的酶液中 l【mlCollagense(2g／L)，50 lDnase 降低[10--12]． (4g／L)，lmlTrypsni(0．5g／L)]，水浴摇床 (37~C， 我们发现在大鼠小直径 DRG(L4一L6)神经元 170r／min)中消化约35min，间或轻轻吹打，使细 中，失活的BK电流普遍存在，表现快速和完全的 胞分散．加入 8ml37℃含胎牛血清的DMEM 培养 失活特性．失活的BK 电流成分确是Ca2+敏感的， 基终止消化．1000r／min离心6min，去上清，加入 大电导的BK通道特异阻断剂ChTX