番茄SlSGR1和SlNIP7基因的功能的研究.pdfVIP

Functional analysis of tomato SlSGR1 and SlNIP7 gene A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Doctor ’s Degree of Science By Deng Lei Supervised by Prof. Chen Guoping Assistant Supervised by Prof. Hu Zongli Specialty: Botany Bioengineering College of Chongqing University Chongqing, China April 2013 中文摘要 摘 要 果实成熟是一个高度程序化的生物过程，涉及到色素代谢、风味形成、信号 转导等诸多方面，大量的基因参与了这一过程。通过前期的研究，我们在番茄 （Solanum lycopersicum ）中克隆得到了两个可能与果实成熟有关的基因 ——SlSGR1 基因和SlNIP7 基因。SlSGR1 基因是我们从番茄滞绿突变体green flesh （gf ）中分离得到的，其在gf 中发生了单核苷酸突变。因其与水稻（Oryza sativa ） SGR 基因高度同源，故命名为SlSGR1 基因。前期的Northern Blot 结果表明SlSGR1 基因的表达与果实成熟和叶片衰老特异相关，并受环境胁迫和乙烯信号的诱导。 为了进一步阐明 gf 的突变机理和SlSGR1 基因的生理功能，我们通过构建 RNAi 沉默载体以及农杆菌介导的植物转基因，获得了16 株NPT II 阳性转基因番茄苗系。 半定量RT-PCR 结果表明其中有5 株达到了对SlSGR1 基因较好的沉默效果。这5 株番茄苗系均表现出与gf 一致的滞绿表型，衰老和黑暗处理均不能诱导其叶片的 黄化。总叶绿素的提取与测定结果表明，SlSGR1 基因的沉默阻断了叶绿素的正常 降解过程。综合上述实验结果，我们认为gf 中SlSGR1 蛋白的错义突变很可能是 导致其滞绿表型的根本原因，而有功能的SlSGR1 蛋白很可能是叶绿素正常降解所 必需的。由于SlSGR1 基因是一个与果实成熟和叶片衰老都特异相关的基因，我们 通过5’端缺失技术和植物转基因技术获得了994 bp、737 bp 、529 bp 、328 bp 以及 152 bp SlSGR1 启动子驱动的GUS 报告基因转基因番茄苗系。然而半定量RT-PCR 和GUS 活性检测结果表明，最长的994 bp SlSGR1 启动子片段还不足以实现对GUS 报告基因的正常调控。这说明SlSGR1 启动子与衰老和成熟相关的核心元件可能还 位于-994 bp 的上游。 SlNIP7 （NR interaction protein 7 ）是我们通过酵母双杂交技术，筛选得到的 可能与成熟特异相关乙烯受体SlETR3 （NR ）互作的蛋白质。其编码基因CDS 区 全长234 bp ，编码77 个氨基酸残基。定量Real-time RT-PCR 结果表明，SlNIP7 基 因在番茄的各个器官和各个发育时期均有一定的表达，但表达量以花器官居高。 此外，SlNIP7 基因的表达在果实成熟后期有显著上调，但这种上调趋势在乙烯不 敏感突变体Nr （Never ripe ）和果实不成熟突变体rin （ripening inhibitor ）中受到 了明显的抑制。与果实成熟过程中的上调趋势不同，SlNIP7 基因的表达随叶