一种从富含多糖的玉米幼穗中提取RNA的方法.pdfVIP

植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2007, 24 (5): 624628, .技术与方法. 一种从富含多糖的玉米幼穗中提取RNA 的方法 朱昀, 王猛, 贾志伟, 练云, 金颖, 王国英* 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室, 北京 100094 摘要 介绍了一种大量提取玉米(Zea mays L.)幼穗总RNA 的有效方法。由于玉米幼穗富含多糖, 用普通的RNA提取方法和 Trizol很难获得高质量的RNA 。在热酚法提取RNA 的基础上, 通过在提取缓冲液中加入低pH值的醋酸钾来去除多糖。所得到 的RNA获得率高, 质量好, 条带完整, 实验证明可直接用于RT-PCR、微阵列等各项后续分子生物学实验。 关键词 玉米幼穗, 多糖, RNA提取 朱昀, 王猛, 贾志伟, 练云, 金颖, 王国英 (2007) . 一种从富含多糖的玉米幼穗中提取RNA 的方法. 植物学通报 24 , 624628 . 从植物组织中提取高纯度、高质量的RNA 是进行 为材料, 取开花前不同发育时期的幼穗。 分子生物学研究的必要前提和关键。分离RNA 的主要 1.2 实验方法 困难在于RNA 分子自身存在2-OH, 稳定性差, 很容易 被广泛存在于植物组织的细胞及外部环境中非常稳定的 1.2 .1 RNase 的灭除 RNA 酶降解。此外, 某些植物组织中的多酚、多糖和 所用的研钵、研杵和药匙均用180°C 烘烤8 小时; 离心 蛋白质以及其它次生代谢物质也会严重影响RNA 的提 管和枪头用0.1%焦碳酸二乙酯(diethylpyroca-rbonate, 取(李宏和王新力, 1999) 。有关富含多糖的猕猴桃(陈昆 DEPC)浸泡12小时后高温灭菌; 所有的提取试剂都用 松等, 1998)、蜈蚣草(何振艳等, 2005)、香蕉(冯斗等, 0 .1% DEPC水配制, 搅拌过夜后高温灭菌(T ris- HCl 2 004 ) 、芒果(杜中军等, 2 00 5 )和非洲菊( 张玉进等, 和SDS 除外, 用灭好菌的0 .1% DEPC 水配制即可) 。 2001)等植物组织的总RNA 提取已有报道, 但尚未见到 实验过程中勤换手套, 以避免皮肤、汗水带来的 从富含多糖的玉米幼穗中提取总RNA 的报道。玉米幼 R Nas e 污染。 穗组织中多糖含量远远高于其它组织, 我们在采用已有 方法提取总RNA 时发现, 多糖由于与RNA 溶解性的高 1.2.2 RNA 提取 度一致而在抽提时无法去除, 它在水相中与RNA形成难 RNA 提取分为以下14 个步骤。(1)配制RNA 抽提缓冲 -1 . 溶的胶状物复合体, 造成RNA获得率的大幅度下降和降 液, 10 mL 中含有2.2 12 5 mL DEPC-H O, 1 mol L 2 -1 . 解。为此, 我们尝试在热酚法提取RNA 的基础上进行 Tris-HCl (pH9.0) 0.325 mL, 4 mol