重金属诱导拟南芥原生质体dna损伤de单细胞凝胶电泳检测学习资料.pdfVIP

植物学报 ChineseBulletinofBotany 2009，44(1)：117—123，、^，、『．chinbullbotany．com · 技术方法 · 重金属诱导拟南芥原生质体DNA损伤的 单细胞凝胶电泳检测 聂志刚’，王艳1l2，李韶山r 华南师范大学生命科学学院，广东省高等学校生态与环境科学重点实验室，广州 510631 暨南大学理工学院，广州 510632 摘要 以拟南芥原生质体为实验体系，研究不同浓度的3种重金属离子对拟南芥原生质体的毒性和DNA损伤的差异。结果表 明，用1—5mmol-L的Zn2+、Cd2+和Cu2+分别处理的拟南芥原生质体，2小时内活力逐渐下降，并表现出明显的浓度依赖性； 与相同浓度的Cd2+和Cu2+相比，Zn 对拟南芥原生质体活力的影响程度较小，表现出较低的毒性。单细胞凝胶电泳检测发现， 用0．1—0．8mmol-L的Zn2+、Cd 和Cu2+分别处理拟南芥原生质体3O分钟，以OTM值表示的原生质体DNA损伤量随重金 属离子浓度的增加而递增：相同浓度(0．5mmol-L)的3种重金属离子相比，Zn对原生质体的遗传毒性明显低于Cu2+和Cd2+。 综合原生质体活力和DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测结果，发现Zn 对拟南芥原生质体的遗传毒性较低，而Cd 和Cu 的遗 传毒性较高。本研究建立的拟南芥原生质体实验体系，结合运用单细胞凝胶电泳技术，能够快速、灵敏地检测重金属对植物 细胞的遗传毒性。 关键词 拟南芥，彗星试验，DNA损伤，重金属，原生质体，单细胞凝胶电泳 聂志刚，王艳，李韶山 (2009)．重金属诱导拟南芥原生质体 DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测．植物学报 44，117—123． 随着人类活动的不断增加和工农业的迅速发展，重 2003；SagiandFluhr，2006)，对细胞内的蛋白质分子、 金属在环境中的释放严重污染了农 田和河流等与人类息 DNA和脂质等生物大分子造成损害，严重时将导致细 息相关的生态系统。重金属被植物吸收后，通过食物链 胞死亡 。GichRer等(2006)报道，在被重金属污染 进人动物体或人体，影响动物的生长发育，并严重危害人 的土壤 中，烟草和番茄植株叶片细胞核DNA损伤 明 类身体健康。 显高于对照。 植物在受到重金属污染时通常会表现出光合作用受 单细胞凝胶 电泳(singlecellgeleIectr0phoresis， 到抑制、叶绿素含量降低、生物量减少、生长迟缓、 SCGE)~称彗星试验(cometassay)是近年来发展起来 植株矮小和根系伸长受抑制直至停止，严重时甚至导致 的可以在细胞水平检测真核细胞DNA损伤的一种遗传 作物产量和品质的降低及植物体死亡。植物对重金属 毒理分析技术，具有简便、快速、灵敏、样品用量少 的抗性及其细胞和分子机理研究，已发展成为植物生态 和无需放射性标记等特点。这一技术可以检测真核细 学和污染生态学的前沿和热点领域。近年来的大量研 胞中的多种DNA损伤，如单链断裂、双链断裂、碱性 究证实，植物适应重金属胁迫的机制包括阻止和控制重 不稳定位点、不完全切除修复位点和DNA交联等。本 金属离子的吸收、体内螯合解毒、体内区室化分割以 实验室对动物细胞单细胞凝胶电泳技术进行改进，使之 及代谢平衡等(许勤松和施国新，2001)。研究表明，重 适合植物材料样品，并成功获得了紫外辐射诱导植物叶 金属诱导植物体产生各种活性氧 自由基(Olmoseta1．， 片DNA损伤的彗星图像和定量分析结果(Jiangeta1．， 收稿日期：2007·1O-17：接受 日期：2008—01一O7 基金项 目：国家 自然科学基金(No30470283、教育部留学回国人员科研启动基金(No．2005·383)、广东省 教育厅 自然科学研究项 目(No．Z02018)和高等学校博士学科点专项科研基金(No．200705740