鱼类鳗弧菌赖解旋酶基因扩增技术的建立.pdfVIP

第37卷第8期 中国预防兽医学报 V01．37．No．8 2015年8月 ChineseJournalofPreventive Medicine Aug．2015 Veterinary doi：10．3969／j．issn．1008—0589．2015．08．14 鱼类鳗弧菌赖解旋酶基因扩增技术的建立 梁君妮，尹伟力，刘 宁，许红岩 (烟台出入境检验检疫局，山东烟台264000) 摘要：为建立一种鱼类鳗弧菌的快速检测方法，本研究以鳗弧茵的toxR基因为靶基因设计特异性引物， 并对反应条件和反应体系进行优化，建立了基于赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的鳗弧茵快速检测方法。结 果显示，该方法对鱼类鳗弧茵检测为阳性，而对其他鱼类病原茵的检测结果均为阴性，具有良好的特异性；标准 菌株茵体基因组DNA最低检测限为30 cfu／mL；利用该方法与 ng／mL，人工污染模拟样品的最低检出限为2．1X102 普通PCR方法对临床120份鱼类样品进行检测，符合率为100％，检出率均高于细菌培养法。本研究建立的检测 鳗弧茵的I-IDA法具有快速、简便、特异、灵敏等特点，适合基层实验室使用，具有广泛的应用前景。 关键词：鳗弧茵；检测；赖解旋酶DNA恒温扩增技术 中图分类号：$852．61 文献标识码：A detectionofVibrio infish Quick anguillarumby isothermalDNA amplificationassay LIANG Jun—ni，YINWei—li，LIUNing，XUHong·yan and (YantaiEntry-exitInspectionQuarantineBureau，Yantai264000，China) Abstract：AdetectionofⅥbno basedonthe isothermalDNA rapid anguillamm helicase·dependent established totoxR methodwas for detection usingprimersdesignedaccordinggene．The specificV．anguillammbyamplification ofthetoxR no forotherfish detectionlimitwas30．0 forbacterial gene，butanyamplifications pathogens．The ng／mL genomic DNAofstandard 2．1x102cfu／mL contaminatedsimulation totalof120clinical strains，and artificially samples．Moreover，a offishweredetectedtheHDA and resultsofthetwomethodswasidenticalwitha samples by assayPCR，respectively．The higher detectionratethanthatofthetraditionalmethodofbact