α1-抗胰蛋白酶研制.pdf

中文摘要 第一部分 Q1_抗胰蛋白酶活性测定方法 及其影响因素 摘 要 目的：研究用发色底物法测定Q1-AT(Q 1-antitrypsin， Q1-抗胰蛋白酶)生物活性时，以正常人混合血浆为参考标 准的血浆稀释度范围和测定的影响因素。 方法：采用酶标仪测定抗胰蛋白酶与过量的胰蛋白酶反 应后，剩余的胰蛋白酶与底物BAPNA(N。 4．nitroanilide ．Benzoyl．DL-arginine 的OD值(405nm)，观察时间和温度对反应的影响，优化正 常人混合血浆(30人份)稀释度范围，建立并验证血浆标准 曲线，同时观察几种物质对测定的影响。 结果：通过优化实验，血浆的稀释倍数在1／50到1／100 辛酸钠等对活性测定无明显影响，而枸橼酸钠浓度 O．125mol／L以上时，Q1-AT生物活性测定结果偏高约20％。 结论：以正常人混合血浆为参考标准品，用酶标仪测定 Q 1-AT I-AT的生物活性，快速、准确，方法稳定可靠，a 制备过程中常用的几种物质，除枸橼酸钠外，对其活性测定 均无影响。 关键词：Q 对硝基苯胺盐酸盐)；胰蛋白酶；正常人混合血浆 中文摘要 第二部分 Q卜抗胰蛋白酶的分离纯化 摘 要 日的：建寺从低温乙醇法分离的向浆FⅣ．1沉淀tp分 离a1-抗胰蛋白酶(C／1-AT)的工艺，为规模化生产提供依 据。 方法：1、聚合物沉淀：除去FIV．1溶解液中的大量杂蛋 FF柱层析：进一步纯化得到纯度 白，2、DEAE—SepHarose 高a1-抗胰蛋白酶，3、用免疫单扩散、双缩脲(或Lowry)、 1-抗胰 蛋白酶的含量、蛋白总量、活性、纯度和特异性等。 结果：纯化样品分析的结果表明，Q1-抗胰蛋白酶的比 Q 活性为0．7～0．8mg1-AT／mg 1．抗胰蛋白酶)，总回收率大于60％。 结论：本研究描述的纯化工艺，可以从血浆FIV．1沉淀 中分离纯化出高纯度的Q1-抗胰蛋白酶，为规模化生产奠定 了基础。 关键词： Cohn组分Ⅳ-l；CI．1-抗胰蛋白酶；聚乙二醇；离 ’ 子交换层析 中文摘要 第三部分 Q卜抗胰蛋白酶的病毒灭活 摘 要 目的：研究辛酸钠在o1-抗胰蛋白酶(a1．AT)病毒灭 活中的应用，确定保护剂和灭活的条件，并对病毒灭活效果 进行验证。初步研究有机溶剂／去污剂(磷酸三丁酯／吐温80， 1-AT 活性的影响。 方法：室温条件下，在a1-AT溶液中加入不同的保护 温孵育不同时间，取样，分别测定活性的变化；对选定的灭 活条件，用辛德毕斯病毒(Sindbisvirus)和伪狂犬病毒 (Pseudorabies 毒灭活前后的Q1-AT活性变化；巴氏法灭活病毒时，加入不 同的保护剂，测定不同保护剂条件下，灭活后Q1-AT活性的 变化。 结果：纯化的Q1．AT样品加入40％蔗糖和2％白蛋白作 1-AT活性1h内下降 病毒和PRV各下降5LgTCID50，Q