IκBαM重组腺相关病毒载体构建及其对大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤的保护作用.pdfVIP

x a I BM重组腺相关病毒载体的构建及其对大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤的保护作用 中文提要 Ird30cM重组腺相关腐毒载体的构建及其对大鼠自体原位肝移 植胆道缺血再灌注损伤的保护作用 中文提要 背景： 肝移植术后胆道并发症发生率高，是影响患者长期存活及导致移植物丢失的最主 要原因之一，因此肝移植后胆道并发症的防治是进一步提高移植受体存活率和远期疗 效的关键。移植肝胆管缺血再灌注损伤是肝移植术后胆道并发症的重要病因学因素， 肝脏缺血再灌注损伤是早期多种炎性因子激活的结果。NF．r,B作为一种普遍存在的转 录因子在调节炎症反应的基因中起关键作用。研究肝胆管缺血再灌注损伤过程中 NF．rd3的作用，并以其为靶点的干预措旋有可能对移植肝胆管缺血再灌注损伤具有保 移植胆道缺血再灌注损伤的保护作用。 第一部分大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤模型的建立及肝脏 再灌注损伤中NF一心激活懈 目的建立稳定的大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤模型，观察建立模型手术 并发症、存活率及肝脏缺血再灌注损伤中NF．1出的激活。 方法门静脉和腹主动脉双重灌注法建立大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤模 transplantation—IRIgroup，LT-IRI group)：行大鼠原位肝移植胆道缺血再灌注损伤；假 手术组(Sham group，SHgroup)：仅行开腹和肝门区解剖手术；分别于术后12h， 24h，72h，7d取肝组织行NF．rJ3免疫组化检测，取外周血检测肝脏酶学指标。 结果共进行大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤模型80例，其中稳定模型60 例，稳定模型期手术存活率约90％，一周存活率约为81．7％。免疫组化显示术后2h x a I BM重组腺相关病毒载体的构建及其对大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤的保护作用 中文提要 VS 最为显著(417．2．a：45．3 57．6-a：5．4，pO．01)。 rain。 结论成功建立大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤模型，无肝期约14+3 肝移植缺血再灌注过程中早期即有NF．r．J3的激活。 关键词 肝移植 大鼠 缺血再灌注损伤 胆道 NF．v,J3 第二部分Ir,BetM基因重组腺相关病毒载体的构建及鉴定 目的构建携带NF．rd3超抑制物Ir,BotM基因的重组腺病毒载体。 293细胞病毒包装，重组腺病毒载体大量扩增，病毒滴度的测定及浓缩纯化。 的Ir,BaM片段；测序鉴定正确；经测定分离浓缩和纯化重组腺相关病毒获得病毒滴 度约为7×108pfu／ml～5x109pfu／ml。 结论成功构建Ir,BaM基因重组腺相关病毒载体，病毒浓缩纯化滴度满足实验要求。 关键词 NF．r．B突变型Ir．Ba腺相关病毒载体重组质粒 保护作用 目的 内皮细胞的凋亡和电镜形态学变化情况，探讨rAAV-Iv．BaM在大鼠肝移植胆道缺血再 灌注损伤中的作用。 方法将Weistar大鼠分为三组：假手术组(单纯行开关腹手术)，对照组(行肝移植 ll IKBoM重组腺相关病毒载体的构建及其对大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤的保护作用 中文提要 westernblot检测NF．1(B mRNA 各时点肝脏酶学的变化及胆管内皮细胞的凋亡和电镜形态学变化。 结果rAAV-InBaM转染组与对照组相比：NF．rd3 p65于术后2h、24h表达具有显著 性差异，核内蛋白水平明显降低，72h后各时点NF．1(B