乌索酸诱导K562细胞和耐柔红霉素的K562细胞凋亡及其机制的初步的研究.pdfVIP

严重阻碍了新药的开发和应用。凋亡是通过系列死亡信号分子活化而导致的主动 死亡过程，在抗肿瘤方面发挥了极其重要的作用，本研究旨在明确乌索酸诱导肿 瘤细胞凋亡的分子机制，为之应用于肿瘤治疗奠定理论基础。 实验材料 1．K562敏感细胞株、K562耐柔红霉素细胞株(K562／DINR) 2．WST-8方法检测细胞增殖活性的相关试剂 3．Annexin V-FITC／PI双标记法检测细胞凋亡的相关试剂 4．Westem Blotting技术分析细胞凋亡机制的相关试剂 实验方法 1．细胞培养 2．细胞增殖分析 1x105／mL，铺于96孔板中，加入不同浓度的乌索酸，培养不同时间，加入lOlL WST-8后继续培养1h，酶标仪测定450nm吸光度。完全培养基作为空白对照，每 个浓度设5个孔。 3．细胞凋亡检测 分别收集对数生长期K562细胞及K562／DNR细胞，用不同浓度乌索酸作用， 溶剂作为对照，培养一定时间后，分别收集1×106细胞，经Annexin／PI双染色， 流式细胞仪检测。 4．细胞凋亡机制研究 用Western 可能机制。对数生长期细胞，加不同浓度乌索酸处理一定时间，收集细胞。提取 的蛋白经12．5％SDS．PAGE电泳分离，电转移至硝酸纤维素膜上，经邻联(二)茴香 acid 胺，O．dianidine和13奈酚磷酸(I]-naphthyl phosphate)显色后检测各种蛋白活化 2 情况。推测出可能的凋亡机制。 勿} 田 皇口 木 1．乌索酸能抑制K562细胞与K562／DNR细胞增殖。 2．乌索酸能诱导K562细胞与K562／DNR细胞凋亡，随着浓度和作用时间的增 加，细胞凋亡率升高。 Caspase一9较对照组明显增加。 胞中AKT的磷酸化即活化受到明显抑制。 组明显增加。 结论 乌索酸能够通过线粒体途径诱导K562细胞与耐柔红霉素的K562细胞凋亡， 其机制可能与抑制Akt的磷酸化相关。 关键词 乌索酸；K562细胞；耐药；细胞凋亡；Caspase；舭；Cyt-C ● 英文论著摘要 ● onUrsolicAcid--InducedinK562and Study Apoptosis K562／DNR cells ective Obj Ursolic named to acid(UA，C30H4803)，alsoprunol，belongstriterpenoids，the molecularofwhichis456．68．UAisa acid weight pentacyclictriterpene naturally inanumberoffoodsandmedicinal andoleanolicacidhave occurring plants．UA similarchemicalstructuresbutdifferinthe ofone ont