脐血嗜碱粒细胞Toll样受体2在哮喘发病机制中的作用.pdfVIP

核细胞(PBMC)，观察嗜碱粒细胞脱颗粒情况，并与正常人作比较。同时检测了患者 过敏原皮试、特异性lgE和粉尘螨刺激后嗜碱粒细胞的脱颗粒程度，分析经TLR途 径的嗜碱粒细胞活化与这三个参数间的相关性。 结果：PGN对过敏性哮喘患者嗜碱粒细胞的脱颗粒作用(40．73％+10．88％)显著高 于LPS(19．63％：1：8．92％)和PolyI：C(22．5％±7．89％)的作用，也显著高于正常人 I：C对过敏性哮喘患者嗜碱粒细胞的脱颗粒程 (15．23％+8．96％)(P0．01)。LPS和Poly PGN是过敏性哮喘患者嗜碱粒细胞脱颗 度与正常人无明显差异(伶0．05)。100p,g／ml 粒实验的适宜浓度。PGN刺激嗜碱粒细胞脱颗粒指数与皮试结果、特异性lgE和粉 尘螨刺激脱颗粒指数无显著相关(JPO．05)。 结论：PGN可增强过敏性哮喘患者外周血嗜碱粒细胞释放介质的能力。由于PGN 被公认是TLR2的特异性配体，因此提示在人嗜碱粒细胞存在TLR2，当它被激活后 可增强过敏性炎症。 关键词：哮喘；嗜碱粒细胞；Toll样受体2；肽聚糖 第三部分观察肽聚糖对哮喘产妇新生儿脐血嗜碱粒细胞 Toll样受体2的作用 目的：研究PGN对哮喘产妇新生儿脐血嗜碱粒细胞TLR2的作用。 方法：从12例哮喘产妇和23例正常产妇的新生儿脐血中提纯嗜碱粒细胞，用 PGN刺激，经TLR2wFITC荧光抗体标记后，通过流式细胞术从抗体水平测定脐血 嗜碱粒细胞TLR2的表达；以及采用原位杂交技术从核酸水平观察脐血嗜碱粒细胞 TLR2mRNA的表达。并与不通过TLR2的刺激剂粉尘螨和高渗甘露醇刺激后的结果 作比较。 结果：流式细胞术检测表明：用PGN刺激后，哮喘产妇新生儿脐血嗜碱粒细胞 TLR2的表达为45．57+10．92％，显著高于正常组21．11+9．09％(尸o．01)。原位杂交结 V 果也显示：用PGN刺激后，哮喘产妇新生儿脐血嗜碱粒细胞的TLR2mRNA的表达 刺激正常产妇及哮喘产妇新生儿脐血嗜碱粒细胞，无论从抗体水平(流式细胞术)还是 从mRNA水平(原位杂交)检测，两组TLR2的表达均无显著变化(P0．05)。 达增高。 关键词：Toll样受体2；肽聚糖：哮喘：嗜碱粒细胞；脐带血 第四部分观察肽聚糖、粉尘螨和高渗甘露醇刺激哮喘产妇新生儿脐血 嗜碱粒细胞后白介素．4的释放 目的：研究PGN、粉尘螨和高渗甘露醇刺激对哮喘产妇脐血嗜碱粒细胞分泌 IL一的作用。 方法：从12例哮喘产妇和23例正常产妇新生儿脐血中纯化嗜碱粒细胞，分别 经PGN、粉尘螨和高渗甘露醇刺激并培养，并以加入缓冲液作为对照，用ELISA法 检测培养的上清液中IL．_4的含量。 结果：PGN、粉尘螨和高渗甘露醇刺激哮喘产妇新生儿脐血嗜碱粒细胞后，其 上清液中IL-_4的含量均升高，分别为3．22+1．03pg／ml、2．96-+0．94pg／ml、3．46-+1．17 化(P0．05)。 结论：PGN、粉尘螨及甘露醇刺激哮喘产妇新生儿脐血嗜碱粒细胞后，均可使 之激活并释放IL_．4。 关键词：肽聚糖；哮喘；嗜碱粒细胞；脐带血：白介素一 Vl 第五部分 比较两种方法纯化的脐血嗜碱粒细胞的功能 目的：比较用流式细胞术或用免疫磁珠法分选获得的脐血嗜碱粒细胞的功能。 方法：12例哮喘产妇和23例正常产妇新生儿脐血，用流式细胞术分选 CD203c+CD45m‘的方法或用免疫磁珠法分选CD203c+CDl1丁-的方法获得脐血嗜碱粒 细胞。测定TLR2配体一PGN、过敏原一粉尘螨浸液、高渗甘露醇刺激后，经 TLR2一FITC荧光抗体标记后，通过流式细胞术从抗体水平测定脐血嗜碱粒细胞 TLR2的表达，并采用原位杂交技术从核酸水平观察脐血嗜碱粒细胞TLR2mRNA的 表达，以及用ELISA法检测培养的上清液中lL一的含量，比较用两种方法纯化的 脐血嗜碱粒细胞的功能。 结果：流式分选法所得脐血嗜碱粒细胞纯度及回收率高于磁珠分选法(P0．01)。 PGN、粉尘螨和高渗甘露醇刺激哮喘产妇新生儿脐血嗜