磷酸钙生物陶瓷表面结构和性质及蛋白质特异性吸附.pdf

磷酸钙生物陶瓷表面结构和性质与蛋白质特异性吸附 生物医学工程 专业 博士研究生：朱向东 指导教师：张兴栋 生物材料植入体内后的初始事件是蛋白质在植入体表面的吸附，吸附的蛋 白质对于随后的细胞行为以及植入体的最终效果起着十分重要的作用。磷酸钙 生物材料具有与人体骨组织的无机成分相似的特点而被广泛用作骨修复替换材 料，其优良的生物学性质己得到了充分的证实。因此磷酸钙生物材料的蛋白质 吸附行为，尤其是对骨相关蛋白质的特异性吸附是目前生物材料科学基础研究 的前沿课题，对于揭示磷酸钙生物材料生物活性本质和骨诱导机理具有非常重 要的意义。 而且普遍使用的是体外单一蛋白体系，对于不同组成和结构的磷酸钙生物材料 蛋白吸附的机理认识不充分，尤其是不同蛋白质之间的竞争吸附本质及其与材 料本身的化学性质和结构的内在联系方面没有给出确切的信息。因此本文从单 蛋白、双蛋白和血清蛋白吸附以及体内扩散盒植入出发，系统地研究不同组成 和结构的磷酸钙陶瓷的体内外蛋白吸附行为，初步探讨了磷酸钙陶瓷蛋白吸附 的机理，揭示了不同组成和结构磷酸钙陶瓷在蛋白吸附行为的相似性和相异性。 蛋白吸附行为由材料和蛋白质本身的性质所决定。材料表面电位、化学吸 附位点、亲水性等表面化学性质是影响其表面蛋白质吸附的重要因素；蛋白质 本身结构、表面电荷、分子结构稳定性、柔性等也是影响其在材料表面吸附的 重要因素。 由于磷酸钙陶瓷组成和结构及表面性质上的上的相似性，决定其具有相似 的蛋白吸附行为。根据接触角和Zeta电位测试结果，磷酸钙陶瓷具有一定的表 面疏水性，在生理pH条件下它们具有负的表面Zeta电位。光电子能谱(x．刚 photoelectron 况发生了较为明显的改变，证实磷酸钙陶瓷的两种吸附位点(带正电的C点和 带负电的P点)都与BSA的吸附有关。 根据BSA在磷酸钙陶瓷颗粒表面的吸附结果，BSA在磷酸钙陶瓷颗粒表 面的吸附都是一个非常快速的过程，可以用一级反应式来描述，同时还可以用 calcium 磷酸钙(biphasic 上的差异是它们具有不同BSA吸附能力的主要原因。磷酸钙陶瓷颗粒表面的 BSA饱和吸附量都远低于理论计算值，因而具有较低的表面蛋白覆盖率。BCP 强的表面疏水性可促使更多的BSA分子在BCP陶瓷颗粒表面吸附聚集。因此， BCP陶瓷比HA有更强的BSA吸附能力。 材料表面的Zeta电位随溶液组成、pH值、离子强度等因素影响，并影响 材料表面的蛋白吸附能力，二者的变化之间具有一定的相关性，可以通过磷酸 钙陶瓷颗粒和BSA之间的静电作用来给予解释。根据不同溶液条件下磷酸钙陶 (13-tricalcium 磷酸钙陶瓷的电势决定离子，溶液中pH值、P04’和Ca2+浓度的变化决定磷酸 钙陶瓷颗粒表面Zeta电位的极性和绝对值的大小，同时对BSA吸附量也会产 生较大的影响；Na+和Cl。虽然不是磷酸钙陶瓷的电势决定离子，但是其浓度变 化引起溶液离子强度的改变也会在一定程度上影响磷酸钙陶瓷颗粒的表面Zeta 电位和BSA吸附，只不过这种影响要受到溶液中那些电势决定离子的制约。 颗粒表面具有类似的竞争吸附行为，LSZ比BSA在磷酸钙陶瓷颗粒表面有更 高的吸附率，磷酸钙陶瓷对LSZ表现出更高的吸附亲和性。由此可以预测体液 中的那些骨生长因子如BMP．2和TGF．131等尽管含量很低，但是磷酸钙陶瓷对 它们高的吸附亲和性极有可能使它们在磷酸钙陶瓷表面吸附聚集，这无疑对磷 酸钙陶瓷骨诱导机理的解释是一个很好的补充。无论是在PBS还是在SBF中， 酸钙陶瓷颗粒表面的竞争吸附过程有所差异。当体系中BSA和LSZ的浓度相 当时，具有较低分子量的LSZ由于具有较大的扩散系数而先于BSA之前达到 磷酸钙陶瓷颗粒表面并发生吸附，但是由于LSZ和BSA之间的静电吸引和磷 酸钙陶瓷颗粒表面空余的吸附位点的存在，BSA仍然能够在表面吸附，只是吸 附量较小。随着体系中BSA浓度比例的提高，磷酸钙陶瓷颗粒表面的初始蛋白 n 吸附就逐渐变成以BSA吸附为主。但是由于高浓度条件下BSA分子的构象改 变程度较小，使得BSA和磷酸钙陶瓷颗粒表面的相互作用变弱。而LSZ由于 与磷酸钙陶瓷颗粒表面的吸附亲和性更强，随着时间的增长，先吸附的BSA分 子就可能被后到达的LSZ所取代。因此，当体系中LSZ浓度一定的时候，LSZ 在磷酸