水稻锚蛋白基因OsBIHN-N22和酯酰辅酶A合成酶基因OsBNHN-N7的克隆鉴定及功能分析.pdf

● OsBNHN-N7的克隆鉴定与表达分析 摘要 导水稻对稻瘟病、白叶枯病和纹枯病等病害的系统抗病性，并在此基础上运用抑 制性差减杂交法分离鉴定了200多个与水稻抗病反应相关的差异表达cDNA。同源 性搜索发现，其中一个差别表达克隆BIHN-n22含有623bp的插入片段，该插入片 断编码的蛋白与植物ankyrin(锚蛋白)类型蛋白具有高度相似性。进一步搜索 发现GenBank数据库中的水稻eDNA序列发现有一个长度为1529bp的差别表达 accession eDNA克隆J023125M12，(GenBank accession et cDNA克隆J013000M21(GenBank a1．， 蛋白具有高度相似性。为研究探讨这个可能的锚蛋白基因的生物学功能以及在水 稻抗病性中的作用，我们以这个已知序列设计引物，我们以前期构建好的水稻全 长cDNA文库为模板克隆了这个基因，并命名为OsBIHN-N22。 这个蛋白属于ANK家族。细胞定位分析表明这个蛋白定位在细胞膜上。对其基 明OsBIHN-N22基因在水稻基因组中以单拷贝的形式存在于水稻的第九条染色 能被苯并噻二唑(BTH)诱导表达，并且在BTH处理后的24h达到很高水平，在 随后的60h内一直维持在相当高的水平上。而在水处理的对照中发现OsBIHN-N22 的表达水平在整个实验检测时期都较低。在BTH处理的水稻幼苗中，OsBlHN-N22 基因的表达在受到稻瘟病菌M．grisea侵染后被快速激活。稻瘟病菌接种后0h即可 检测到伪B删Ⅳ-Ⅳ22基因的激活表达，而且在随后的18h内强度增加，并在48h内 维持在一个相当高的水平上。在没有BTH处理，只有稻瘟病菌接种的水稻叶片中 X 直到6h才有诱导表达，然后在18h内可以检测到}E较明显的表达水平，随后迅速 降低。在水稻与稻瘟病菌的非亲和性互作中。OsBIHN-N22基因在接种后的6h就 能检测到其快速表达，而在亲和性互作中则只有在361v,t有微弱的表达。 在与水稻抗病反应相关的差异表达cDNA中，另外一个长度为1897bp的 差别表达克隆002·112一H10(GenBankaccession NO．AKl06615)。这个克隆与植 物中的AMPBP(AMP-bindingprotein)蛋白家族中的酯酰辅酶A合成酶类 (acyl-CoA 了一对特异性引物，从水稻的cDNA文库中通过PCR扩增到这个序列，并把这 个基因命名为OsBNHN-N7。 电点为7．87，含有一个Caic(Acyl—CoA ligases 水稻基因组内。透过细胞定位实验也证明OsBNHN-N7编码蛋白定位在细胞质膜 上。 的表达水平；而在水处理的对照中只有较低的本底表达水平。另外我们在研究中 的6小时就被快速的激活表达，其后表达水平继续增强并持续稳定～个高水平 上。在水处理的对照中，稻瘟病菌接种后36小时内只有很微弱的低水平诱导表 达。在利用水稻的一对近等位基因系H8R和HSS研究与稻瘟病菌的亲和与非亲 和性互作中发现，与H8R的非亲和性互作中，OsBNHN-N7基因能被快速激活表 达，而与H8S的亲和性互作中，只有极微弱的表达。 关键词：水稻(OryzasativaL)；诱导抗病性；苯丙噻二唑；稻瘟菌(朋磅g唧Dr珐P grisea)；OsBlHN-N22；OsBNHN-N7；接种：ankydnrepeat；AMP结合蛋白 MolecularandFunctionalof Cloning Analysis ProteinOsBIHN-N22and Ankyrin—Repeat Protein