胎儿食管上皮成熟分化及食管上皮癌变过程形态学变化特征比较与研究.pdf

胎儿食管上皮成熟分化与成人食管上皮癌变失分化过程中分子变化 对比研究 博士研究生： 邢国兰 导 师： 王立东 河南省食管癌重点开放实验室 郑州大学基础医学院 郑州大学第一附属医院 郑州450052 摘要 1 研究背景 河南林州市(原林县)及其比邻的辉县、安阳等地区是我国，也是世界上食 管癌(EC)发病率和死亡率最高的地区，目前仍是引起该地区肿瘤相关死亡的主 要原因。尽管己发现许多食管癌变相关分子改变，但是目前Ec发生发展的分子 机制仍不十分清楚，而且缺乏用于高危人群食管癌预警和早期诊断的敏感而特异 的分子标志物。近年研究提示，上皮细胞多阶段癌变演进过程中，常异常表达胚 胎发育过程中出现的蛋白，这些蛋白在成熟分化的组织中极少表达，利用这些异 常蛋白作为肿瘤分子标志物，已被应用到临床肿瘤的早期诊断(如甲胎蛋白，等)a 胎儿食管上皮发育是一种由幼稚单层柱状上皮逐渐发育成熟为复层鳞状上皮，由 分化不成熟逐渐成熟，其上皮细胞由分裂增殖活跃的幼稚细胞逐渐趋于成熟分化 和分区(底层干细胞，中层增殖、储备细胞，表层成熟、脱落细胞)，这一发育 过程与成人食管上皮癌变多阶段演进过程正相反，后者是由成熟分化的上皮组织 在致癌因素作用下，出现过度增生和分化异常(失分化)最终发展为癌。很显然， 比较胎儿食管上皮成熟分化和成人食管上皮失分化癌变二个完全相反过程中的 上皮细胞形态和分子变化特征及其与细胞增殖和分化的关系，将为进一步阐明食 管癌变的分子机制，筛选和建立用于高危人群预警和早期发现的分子标志物等提 塑捌丕芏2四Z屋坦±芏色监塞 膪且盒萱土鹰盛垫筮丝兰盛厶盒萱上应遣銮堇捏主筮王窑丝盟丝受宜 r 供重要的理论基础和手段。但是，目前有关不同胎龄食管上皮分子变化与成人食 管上皮癌变过程中的分子改变的比较研究国内外尚未见报道。本研究室及其它研 究室近年的研究提示，肿瘤抑制基因p53．Rb系统改变是河南食管癌高发区居民 食管癌和癌前病变组织变化频率最高的分子改变，正常，癌前病变和癌患者血清 蛋白质组分析提示其蛋白质谱存在明显差异显著蛋白。本研究正是在上述研究的 基础上，利用蛋白质组学、免疫印迹、RT-PCR、免疫组化以及电镜超微结构和 组织病理学等技术，对比分析来自河南食管癌高发区3．10个月不同胎龄食管上 皮成熟分化和成人食管上皮癌变多阶段演进失分化过程中的分子变化差异及其 与细胞增生和分化的关系，旨在筛选和建立增生和分化异常的分子标志物，加深 对食管癌变机理的了解，为确定高危人群预警和早期发现的分子标志物提供重要 的理论依据。 2 材料与方法 2．1研究对象 2．1．1胎儿食管172例(男性61例，女性109例，2例无性别)人胎儿食管组 织标本均来自河南省辉县计划生育服务中心，其中胎龄3个月31例(18％)、4 2．1．2成人食管 17例成人食管上皮标本来自河南省林州市中心医院和姚村食管癌医院，所 有患者在术前均未接受任何的化疗或放疗。17例食管癌患者包括男性10例，女 性7例，其平均年龄为60±7。 2．2标本的收集与处理 2．2．1胎儿食管 胎儿食管标本收集和处理：胎儿食管标本取自合法流产及米索针剂(前列腺 素类)引产正常胎儿，根据孕妇提供末次月经时间结合测量胎儿顶跟长度及手、 足形态核实胎龄。胎儿引出后2个小时内，解剖出整个食管和胃上1／3部，沿食 管纵轴将食管全层1／2切开，一半经85％酒精固定，剩余的一半入液氮中保存， 后转入．800c冰箱保存用于DNA、RNA的提取。 2．2．2成人食管 Ⅱ 食管癌手术切除标本离体后，均在2小时内沿纵轴剖开。根据卢戈氏液对食 管上皮增生活跃组织着色浅或不着色的原理，每例手术标本的一半先经卢戈氏液 染色后对染区和不染区食管粘膜分别取材，尽量于肿瘤实体5cm之外或手术切 缘，以后的处理及另一半标本的处理方法同2．2．1。 2．2．3电镜