腺病毒载体转染mIL-4基因对小鼠移植心脏的保护作用实验和研究.pdf

华孛辩技_夫学臻济医学院 搏I：学证论文 腺病毒载体转染raiL-4基因对小鼠移檀心脏 保护作用的实验研究 警孛秘羧大学翳济星学貔辫震瓣滚莲浣瓣富移攘磅究掰 薄±研究生 雯浇峰 导 师 夏穗生教授 摘 要 第一部分 大鼠颈帮舅霞心脏移植模墅的建立及术中常觅阍题 的分析翻处理 鑫静：建立大鬣颈部弄位心麓移植禳塑，分辑手术过程中鬻冤熊溺题并经理，为 快遴掌握该技术提供理论基础。方法：以sD大鼠为供体，Wistar大鼠为受体建立 大鼠颈部异彼心脏移植模型。观察手术过獠中各环节出现的问题并加以改避。结 果：常见的问题有动静脉梗阻、出瓶，心黢不复跳，麻醉效果差等。经过方法的 改进可以减少和避免问题的出现。缩论：只要处理好常见的几个问题，就可以很 快的摄毫手术成功攀。 华中稀技大学秘济医学院 蒋壬攀谯论文 筵二部分 HTK液和Uw液对大鼠原代心肌细胞冷保存的保护作用 目蛇：研究HTK液和uw液对体外培养的大鼠原代一fl,肌细胞冷保存中的保护作用。 方法：体外培养大鼠原代心肌细胞，分别用生理盐水，uw液和HTK液在0～4。C保 著低下，，0虢缨庭黪生存率剿辍显著懿亳予耋理楚承缝。{嚣在12h，HTK液缀豹AST 和LDH—L显藩低于Uw液组，心肌细胞的生存率在8h和lOh也明显高于Uw液组。 结论：HTK滚和u释液均对体终培养的大藏蘸{弋心飘害霭稳韵冷傈存霜明显瀚保护俸 用。而HTK液相对于uw液熙能延长对心肌细胞的冷保存时间。 第三部分 1，6二磷酸果糖鄹HTK液对大鬣艨代心瓣缨胞冷保存憋保护作耀 誊鹣磷究l，6二磷酸条糖釉HTK滚在俸羚涪葬豹大鬣霖代一ti,魏缨蕤冷保存孛韵缣 护作用。方法体外培养大鼠原代心肌细胞，分别用生理盐水(A织)、1，6二磷 活力，台盼蓝染色法计算心肌细胞的生存率。结果c组和D组的AST、LDH—L均比 酸果糖加HTK液的混合液均对体外培养的大鼠原代心肌细胞的冷保存有明显的保 护{乍瘸。蔼混合滚穗对于HTK液在短期肉辩心瓶缁稳酌冷绦存有受好豹效梁。 2 华中辑拄夫学秘济医学院 蒋圭学证论文 第四部分 mIL-4基因腺病毒载体的构建 匿魄：梅建含mIL一4慕因的熬缀腺病毒载体，并在血管虑皮纲胞中避行蛋白衰达鉴 5183，使之同源重组，产生腺病毒基因组质 pAdEasy．1电穿孔共转染E．coil菌株m 垃(pAd—mIL-4)，然磊经Pacl酶甥线淫纯，l警溪薅分警pAd．mIL一4转染293翁 胞，包装出其有感染力的复制缺陷型的重组腺病毒激体Ad—mIL一4。扩增后收获病 毒，氯纯铯密度梯瘦离心纯亿，检测病毒滴度。羹组艨病毒感染小鼠盘管内皮细 测序分析表明克隆的mlL-4基因与文献报道一致，酶切鉴定证实mIL-4基因正确地 测上清液， mIL-4的水平在血管内皮细胞中获得离效表达。结论：成功构建了含 有mIL一4基瓣载重缀艨病毒裁薄，黧缝骧爨毒粪§舂效套导mIL一4基邃在盘謦囊皮继 胞中表达，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 关键词mIL一4墓翻；竞隧与鏊定；豫病毒载薄；蘩因表达 第五部分 腺病毒载体转染mIL-4基因对小鼠移植心脏的保护作用 目的研究腺病毒载体转染mIL一4纂困对小鼠移植心脏的缣护作用，并探讨其作用 枧制。方法首先掬建含意mIL-4基医的腺瘸毒载体，以小藏颈邦心照移辕