温度对尼可地尔激活豚鼠心室肌细胞膜表面K-%2cATP-通道影响.pdfVIP

温度对尼可地尔激活豚鼠心室肌细胞膜表面Km通道的影响 温度对尼可地尔激活豚鼠心室肌细胞膜表面Km通道的影响 专 业：人体解剖与组织胚胎学 博士研究生： 靳三庆 导 师： 姚志彬 教授 摘 要 自从Noma首次报道在豚鼠心室肌细胞膜上存在着三磷酸腺苷敏感性钾通道 (ATP--sensitive 研究，发现其广泛存在于哺乳动物心血管系统中，在正常生理状态下处于关闭状 态，在缺血或低氧等导致细胞内ATP减少时该通道开放使K+外流，导致细胞膜超 极化和动作电位时程缩短；其功能状态不受电压影响，只受细胞内ATP含量变化 的调控；其开放并不需要细胞内ATP含量有大幅度的降低，且其开放对心肌的电 机械活动有很强的抑制作用。总之，K^。通道是以细胞内的ATP／ADP水平为门控 因素、非电压依赖性的内向整流钾离子通道，K。。通道开放后通过细胞膜超极化， 使C矿内流减少，血管舒张，心肌收缩力下降，动作电位时程缩短，减少心肌对 氧的需求，增加能量贮备。 channel K盯P通道可被特异性的开放剂(potassiumopeners，PCOs)激活 普卡林(aprikalim)， 在临床心脏手术中，常规使用心脏停跳的心肌保护方法，最常用的停跳液为 高钾停跳液。虽然钾停跳液(去极化停跳液)临床应用50多年，具有可接受的 临床效果，但却具有本质上的缺点。由于细胞外高钾而使心肌细胞膜不断地去极 化可以通过多种途径导致细胞内钠、钙、氯离子的堆积。为了纠正这些离子失衡， 温度对尼可地尔激活豚鼠心室肌细胞膜表面KATP通道的影响 心肌细胞激活各种各样的离子泵，同时消耗大量的能量。这种离子和代谢的紊乱 被认为是术后心肌顿抑、心律失常、缺血性损伤等的病因学因素。另外，细胞外 的低张性可使水分进入细胞内而使细胞水肿。 ‰通道和Pcos被发现后，有学者于1993年首次提出了超极化停跳的概念， 即通过大剂量PC0s激活K。通道使心肌细胞膜超极化后动作电位时程缩短、幅度 和钾停跳相比，具有更好的心肌保护效果。其后大量研究表明K．。通道开放剂诱 导的超极化停跳具有较好的心肌保护效果。 心肌细胞膜上K。通道已经被发现了二十余年，该通道的特性已经被广泛研 究，然而温度对其开放影响的研究却很少，更加没有深低温下该通道被激动剂激 活情况的研究。目前，虽然个剐研究表明K。通道的开放是温度依赖性的，但仍 有大量的超极化停跳心肌保护是在深低温的条件下完成的。我们认为KATP通道的 开放在一定的意义上是一种生理过程或病理生理过程，可能在低温下很难被激 活。因此，有关温度对该通道开放的影响确需研究阐明。 为此，本研究结合临床实际，着重探讨不同温度对KATP通道开放剂尼可地尔 激活豚鼠心室肌细胞膜KATP通道特性的影响，特别是对激活通道所需要的时间、 通道电流、膜电位等方面的影响，为深入阐明超极化停跳的机制及其影响因素提 供新的实验依据。 材料与方法 本研究共分三部分进行，从第一部分到第三部分逐步深入。各部分的研究内 容有重复之处，但每一部分都是独立进行的研究。 1．国产尼可地尔(ImM)在不同温度下对KATP通道特性的影响 1．1单个豚鼠心室肌细胞的制备与保存 成年健康豚鼠，体重250 g～350g，雌雄不拘，由中山大学实验动物中心 Ⅱ 温度对尼可地尔激活豚鼠心室肌细胞膜表面Km通道的影响 提供。使用急性酶解法从豚鼠心脏上分离出单个心室肌细胞。简述如下：用20 ％乌拉坦(1500mg／Kg，ip)麻醉后，腹腔内注射肝素500Iu／只，迅速开胸取心 置于Langendorff灌流装置，主动脉逆行插管灌流无钙台氏液5分钟后，改为酶 解液灌流lO～15分钟。将心室肌分次取下，剪碎置于KB液中用吸管轻轻吹打， 使细胞脱落后保存于4℃的KB液中备用，提供良好的单个活细胞，6小时后开始 实验。无钙台式液、灌酶解液均以95％l()2+5％C02饱和，灌流过程