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中山大学硕士论文 用siRNA沉默c-jun对小脑颗粒神经元的保护作用 专业： 药理学 硕士生： 李丹 指导老师：黎明涛教授 摘 要 哺乳动物神经元凋亡的分子机制越来越受人们的关注，因为神经元的这种死 亡形式对神经系统的正常发育起着举足重轻的作用，异常的神经元凋亡是人类神 经退行性疾病的病理机制。现在科学研究目标是确定神经元死亡机制的关键组 分，以及细胞内信号转导途径对细胞死亡程序的调控。 mmol／L 时，胞外25 经元的分化、成熟和存活，而去血清、复极化浓度的KCl(5 基可诱导分化成熟的小脑颗粒神经元凋亡。由于小脑颗粒神经元来源丰富、体外 培养的同质性高，所以此凋亡模型已被广泛应用于中枢神经元凋亡机制的研究。 研究目的： 元凋亡的影响作用 2．为研究c．Jun在凋亡中的作用机制提供新的工具 实验方法及结果： 1．在撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时，JNK／c．Jun通路激活 中山大学硕士论文 mmol／LKCl， 体外培养7天的小脑颗粒神经元，从含去极化浓度钾离子(25 mmol／L 25K)的培养基中转移至低钾培养基(5 KCl，5K)中诱导凋亡。利用 Western c-junmRNA水平；利用报道基因检测c-jun (10 蛋白水平都升高。 2．JNK／c．Jun是神经元凋亡的关键通路 用．INK抑带0齐0 CEPl1004(2 SP600125(10“mol／L)、MLK抑带0齐Uumol／L) 33258 进行核染色统计凋亡率，观察对小脑颗粒神经元凋亡的影响。结果显示： 凋亡。以上结果表明：JNK／c．Jun是神经元凋亡的关键通路。 3． siRNA保护小脑颗粒神经元 c-jun 运用小分子干扰的设计软件及其原则，设计干扰序列，通过BLAST，目的干 扰序列与其他基因没有显著的同源性，并将合成的具有发夹结构的寡核苷酸链克 转染293细胞，Western 用钙磷沉淀的方法共转染小脑颗粒神经元，免疫细胞化学方法检测对内源性 以上结果表明：c-jun 重要作用。 中山大学硕士论文 结论： 1．成功构建c-jun干扰质粒 2．c-jun干扰质粒能够有效沉默小脑颗粒神经元内源性c-jun 3．沉默内源性c-jun保护小脑颗粒神经元 关键词：凋亡；小脑颗粒神经元；JNK；c．Jun；小分子干扰 III ThesmallinterferenceRNAof can c-junprotect neurons granule Dan Postgraduate：Li Mingtao Supervisor：Prof．Li Abstract mechanismsof in considerableinterestinthemolecular Therehasbee