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月季未成熟胚农杆菌转化因子的优化 摘要 为了解决月季遗传转化的关键步骤——再生体系的建立，以‘漂多斯’、‘蓝丝带’、‘索奴拉’ 3个月季品种的未成熟胚为材料，研究了月季再生芽诱导和伸长的条件。结果表明，3个品种都能 够在适宜的培养基上通过直接器官发生途径诱导出再生芽，并且zT单独使用或较高浓度的zT与 较低浓度的NAA结合使用更有利于再生芽的诱导。‘漂多斯’在MS+ZT0．5mg·L．1培养基上再生 nag·L-1培养基上再生芽诱导 芽诱导率最高，为33．3％；‘蓝丝带’在MS+ZT4．0nag·L．1+NAAl．0 率最高，也为33．3％；‘索奴拉’在MS+ZT0．5 rag·L_1培养基上再生芽诱导率最 mg·L_1+NAA0．5 高，为16．7％。再生芽在MS+ZT0．5 nag·L．1培养基上以及不含植物生长调节剂的MS基本培养上能 够伸长得到具茎和叶的再生植株，而MS基本培养基更有利于再生芽伸长。以未成熟胚为外植体 诱导再生芽时，月季果实的贮藏时间不宜超过90d。 为了优化农杆菌介导的月季遗传转化体系，以月季未成熟胚为受体，研究了勋n浓度、培养 基、预培养时间、脱苗抗生素种类，光照条件和在共培养培养基中添NAS对遗传转化的影响。结 Kan选择压浓度即可抑制非转化再生芽的诱导：遗传转化适宜的培养基为 果表明，50mg-L．1 素Carla比Cefjff；共培养时16h光照培养比暗培养有利于转化外植体的生长；共培养培养基中添加 AS能够提高转化率。 关键词：月季，未成熟胚，再生，转化 图表清单 圈1—1月季再生发生途释模式……………………………………………………………………1 圈2．1t漂多斯’不同贮藏时间污染率及再生率统计图……………………………………18 图2-2贮藏后胚直接形成胚芽…………………………………………………………………．18 图2．3白色胚转变为绿色…………………………………………………………………一20 图2—4诱导山再生芽…………………………………………………¨．…………………………………………．．20 图2-5再生芽在MS培养基上伸长成植株……………………………………………………21 圈2—6多个再生芽伸长成植株………………………………………………………………21 图2-7增殖的丛生芽………………………………………………………………………………………．．21 图3·1假阳性芽的诱导(左)与死亡(罩-)………………………………………………～28 图3—2Kan抗性芽………………………………………………………………………………………一28 图3．3Kan抗性愈伤组织…………………………………………。……………………………28 图4．1获得月季抗性植株技术路线建议 表】．1月季再生植株研究进展……………………………………………………………．．6 表1．2月季遗传转化研究进展……………………………………………………………………13 表2-1月季未成熟胚再生芽诱导培养基………………………………………………………17 表2．2‘漂多斯+不同贮藏时问污染率与再生率统计表……一……………………………18 表2-3片季来成熟胚再生芽诱导率统计表………………………………………………．．19 表2．4月季未成熟胚再生芽诱导率方差分析表………………………………………………．19 表2—5植物生长调节荆对再生芽伸长的影响…………………………………………………20 表3—1Kan浓度对外植体生长及再生的影响…………………………………………………24 表3．2不同预培养时间及不同培养基外植体存活率统计表……………………………………25 表3-3预培养时问及培养基对外植体存活辜影响方差分析表…………………………．25 表3—4添加AS处理外植体存活率统计表…………………………………………………．．25 表3—5不同抗生索种类处理外楂体存活率统计表…………………………………………．．26 表3·6光、暗培养处理外植体存活率统计表………………………………………………26