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月季未成熟胚农杆菌转化因子的优化
摘要
为了解决月季遗传转化的关键步骤——再生体系的建立,以‘漂多斯’、‘蓝丝带’、‘索奴拉’
3个月季品种的未成熟胚为材料,研究了月季再生芽诱导和伸长的条件。结果表明,3个品种都能
够在适宜的培养基上通过直接器官发生途径诱导出再生芽,并且zT单独使用或较高浓度的zT与
较低浓度的NAA结合使用更有利于再生芽的诱导。‘漂多斯’在MS+ZT0.5mg·L.1培养基上再生
nag·L-1培养基上再生芽诱导
芽诱导率最高,为33.3%;‘蓝丝带’在MS+ZT4.0nag·L.1+NAAl.0
率最高,也为33.3%;‘索奴拉’在MS+ZT0.5 rag·L_1培养基上再生芽诱导率最
mg·L_1+NAA0.5
高,为16.7%。再生芽在MS+ZT0.5
nag·L.1培养基上以及不含植物生长调节剂的MS基本培养上能
够伸长得到具茎和叶的再生植株,而MS基本培养基更有利于再生芽伸长。以未成熟胚为外植体
诱导再生芽时,月季果实的贮藏时间不宜超过90d。
为了优化农杆菌介导的月季遗传转化体系,以月季未成熟胚为受体,研究了勋n浓度、培养
基、预培养时间、脱苗抗生素种类,光照条件和在共培养培养基中添NAS对遗传转化的影响。结
Kan选择压浓度即可抑制非转化再生芽的诱导:遗传转化适宜的培养基为
果表明,50mg-L.1
素Carla比Cefjff;共培养时16h光照培养比暗培养有利于转化外植体的生长;共培养培养基中添加
AS能够提高转化率。
关键词:月季,未成熟胚,再生,转化
图表清单
圈1—1月季再生发生途释模式……………………………………………………………………1
圈2.1t漂多斯’不同贮藏时间污染率及再生率统计图……………………………………18
图2-2贮藏后胚直接形成胚芽………………………………………………………………….18
图2.3白色胚转变为绿色…………………………………………………………………一20
图2—4诱导山再生芽…………………………………………………¨.…………………………………………..20
图2-5再生芽在MS培养基上伸长成植株……………………………………………………21
圈2—6多个再生芽伸长成植株………………………………………………………………21
图2-7增殖的丛生芽………………………………………………………………………………………..21
图3·1假阳性芽的诱导(左)与死亡(罩-)………………………………………………~28
图3—2Kan抗性芽………………………………………………………………………………………一28
图3.3Kan抗性愈伤组织…………………………………………。……………………………28
图4.1获得月季抗性植株技术路线建议
表】.1月季再生植株研究进展……………………………………………………………..6
表1.2月季遗传转化研究进展……………………………………………………………………13
表2-1月季未成熟胚再生芽诱导培养基………………………………………………………17
表2.2‘漂多斯+不同贮藏时问污染率与再生率统计表……一……………………………18
表2-3片季来成熟胚再生芽诱导率统计表………………………………………………..19
表2.4月季未成熟胚再生芽诱导率方差分析表……………………………………………….19
表2—5植物生长调节荆对再生芽伸长的影响…………………………………………………20
表3—1Kan浓度对外植体生长及再生的影响…………………………………………………24
表3.2不同预培养时间及不同培养基外植体存活率统计表……………………………………25
表3-3预培养时问及培养基对外植体存活辜影响方差分析表………………………….25
表3—4添加AS处理外植体存活率统计表…………………………………………………..25
表3—5不同抗生索种类处理外楂体存活率统计表…………………………………………..26
表3·6光、暗培养处理外植体存活率统计表………………………………………………26
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