Sigma-1受体的激动剂对电压门控型钠离子通道Nav1.2的调节作用的研究.pdf

II IIl IIIIII I II IIII IIIII 目 录 Y2701740 目勇匙…………………………………………………………………………………………………………………1 缩略语及符号…………………………………………………………………………·3 中文摘要………………………………………………………………………………·7 英文摘要………………………………………………………………………………·9 前言……………………………………………………………………………………13 材料与方法…………………………………………………………………………17 实验结果………………………………………………………………………………31 第一部分Sigma—l受体SDNavl．2的表达检测……………………………………·31 1 1．1 Sigma．1受体mRNA水平的检测………………………………………·31 1．2 Sigma．1受体蛋白表达水平的检测……………………………………·31 2．pEGFPNl．olR质粒的构建鉴定…………………………………………“32 2．1 Sigma．1受体编码区序列的扩增………………………………………·32 2．2 2．3 PCR阳性克隆的的酶切鉴定…………………………·32 pEGFPNl．olR 2．4 pEGFPNl．olR酶切鉴定阳性克隆的测序鉴定………………………·33 2．5 R转染HElQ93T和COS．7的表达检测…………………··34 pEGFPNl．ol 3．皮层神经元和颗粒细胞中Navl．2通道的表达水平检测…………………-34 3．1 3．2 Western blot检测Navl．2的蛋白表达水平………………………………35 4．小结与讨论…………………………………………………………………·35 第二部分(+)．SKF10047对Navl．2的调控作用………………………………37 10047对Navl．2的抑制作用…………·37 1．Sigma．1受体的激动剂(+)．SKF 1．1 (+)．SKF 10047能够可逆地抑制Navl．2的最大电流氐。………………37 1．2(+)．SKF 10047对Navl．2的电流的抑制作用的浓度依赖性…………38 1．3 (+)．SKF 10047对Navl．2通道的稳态激活特性的影响………………38 1．4(+)．SKF 10047使Navl．2通道的稳态失活特性的影响………………39 2．(+)．SKF 10047对Navl．2调节的作用机制………………………………·41 2．1 PKA与PKC信号通路与(+)．SKF 10047对Navl．2调节的关系……·4l 2．2 G蛋白与(+)一SKF10047对Navl．2调节的关系……………………··43 2．3 10047对Navl．2调节的关系………………45 Sigma一1受体与(+)一SKF 2．4