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Master Dissertation of Chongqing University
Effects of Tetrapeptide Epithalon with
Telomere and Telomerase Activities in
HepG2 and L-02 Cells
Master Candidate: Tong Shiliang
Supervisor: Prof. Wang Yuanliang
Major: Medicinal Chemistry
College of Bioengineering
Chongqing University
November, 2007
摘 要
目的:动物的一种内分泌腺——松果体,能分泌一种名为“Epithalamin” 的缩氨
酸,这种成分可被人工合成名叫“Epithalon” 的四肽(Ala-Glu-Asp-Gly )。有报道
Epithalon 在动物体内具有一定的肿瘤抑制作用,本文的目的就是研究 Epithalon 作
用于人肝癌细胞 HepG2 后,对 HepG2 细胞的生长情况、细胞端粒长度以及细胞端
粒酶活性所产生的影响。同时,通过和 Epithalon 作用于人胎肝细胞 L-02 后细胞生
长情况、端粒长度以及端粒酶活性的变化进行对比,研究 Epithalon 对细胞端粒和
端粒酶的影响,探寻其可能的作用机制。
方法:(1)采用 Fmoc 固相多肽合成法制备 Epithalon 四肽,高效液相层析
(HPLC )纯化处理,运用NMR 和质谱进行分析鉴定。
(2 )通过MTT 法检测 Epithalon 四肽对人肝癌细胞株HepG2 以及人胎
肝细胞 L-02 增殖与活力的影响;用细胞形态学观察用药后细胞的生长情况,流式
细胞仪检测细胞周期。
(3 )根据MTT 检测结果,特定浓度用药一段时间后,运用端粒酶重复
序列扩增-焦磷酸根酶联发光技术(TRAP-ELIDA )检测人肝癌细胞株HepG2 和人
胎肝细胞 L-02 端粒酶活性,流式荧光原位杂交法(FLOW-FISH )检测端粒长度。
结果:(1)核磁与质谱结合分析鉴定表明,合成产物确为Epithalon 四肽。
(2 )MTT 法检测 Epithalon 四肽对人肝癌细胞株 HepG2 增殖与活力的
影响显示: 低浓度(0.00256~0.0256μmol/L )和高浓度(25.6μmol/L )的Epithalon
对细胞生长影响不大,而 0.256~2.56μmol/L 的 Epithalon 对 HepG2 细胞有一定抑
制作用。流式细胞仪检测细胞周期表明,Epithalon 有一定的 S 期阻滞作用。Epithalon
对人胎肝细胞株L-02 增殖与活力的影响显示:2.56μmol/L~25.6μmol/L 的Epithalon
对 L-02 细胞增殖有促进作用。
(3 )运用TRAP-ELIDA 检测人肝癌细胞株 HepG2 端粒酶活性,流式荧
光原位杂交法(FLOW-FISH )检测端粒长度的变化,发现加入 Epithalon 后对 HepG2
细胞的端粒酶活性和端粒长度有一定的促进或延长作用,但这种作用并不明显。
对 L-02 细胞而言,Epithalon 能有效的提高细胞端粒酶活性,并使细胞端粒的长度
得到延长。
结论:研究显示特定浓度的 Epithalon 在体外对肿瘤细胞 HepG2 有一定的抑制
作用,这种抑制作用可能主要表现为 S 期阻滞,其对 HepG2 细胞端粒酶和端粒长
度也有一定的正向影响。与此同时,Epithalon 和人胎肝细胞 L-02 的作用显示,
Epithalon 具有激活端粒酶,延长端粒、促进 L-02 细胞生长的作用。这提示我们,
I
Epithalon 能通过提高端粒酶活性来延长端粒,进而起到延长正常细胞乃至生物体
寿命的作用。Epithal
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