ERp46在棕榈酸诱导内质网应激中的保护作用Exendin-4干预及研究.pdf

万方数据 目 录 摘 要1 Abstract 3 前 言6 第一部分：棕榈酸对βTC6 细胞的毒性作用及对ERp46 表达的影响9 引 言9 材料和方法10 结 果19 讨 论27 小 结30 第二部分：ERp46 在棕榈酸所致βTC6 细胞脂毒性损伤中的保护作用………..31 引 言31 材料与方法32 结 果41 讨 论58 小 结62 第三部分：Exendin-4 对βTC6 细胞ERp46 表达及内质网应激的影响63 引 言63 材料和方法64 结 果68 讨 论74 小 结77 全文总结78 参考文献79 综 述92 附录一 英文缩略词表102 致谢…………………………………………………………………………………104 在校期间发表的论文情况…………………………………………………………105 万方数据 ERp46 在棕榈酸诱导的内质网应激中的保护作用及 Exendin-4 的干预研究 摘 要 内质网应激是胰岛细胞功能障碍和胰岛素抵抗发生的重要分子机制之一。 内质网新发现的蛋白ERp46 （Endoplasmic reticulum protein 46 ）高表达于胰岛组 织，研究发现在胰岛细胞糖毒性中，ERp46 可一定程度上改善胰岛细胞功能， 但其生物学功能未完全明确。目前，尚无ERp46 在胰岛细胞脂毒性中作用的报 道。本文旨在探讨ERp46 是否在饱和脂肪酸棕榈酸所致的胰岛 β 细胞毒性损伤 中发挥保护作用，观察胰高血糖素样肽-1 （The incretin hormone glucagon-like peptide-1，GLP-1）长效受体激动剂 Exendin-4 对胰岛 β 细胞脂毒性的干预作用 及对其ERp46 表达的影响，为2 型糖尿病 （Type 2 diabetes ，T2DM ）提供可能 的干预与治疗新靶点。本研究分为三部分： 第一部分：棕榈酸对βTC6 细胞的毒性作用及对ERp46 和胰岛素 （Insulin ） 表达的影响 本部分研究观察饱和脂肪酸棕榈酸对小鼠胰岛素瘤βTC6 细胞株增殖活性、 Insulin 及ERp46 表达的影响。应用CCK8 法检测细胞增殖活性的变化，用Real-tine PCR 和Western blot 方法检测ERp46 及Insulin 在mRNA 和蛋白水平的变化。结 果显示，棕榈酸可时间-剂量依赖性降低细胞增殖活性，减少ERp46 及Insulin 的 表达，提示ERp46 可能与棕榈酸所致的βTC6 细胞脂毒性损伤密切相关。 第二部分：ERp46 在棕榈酸所致βTC6 细胞毒性损伤中的保护作用 为了探讨ERp46 在高棕榈酸条件下对βTC6 细胞功能的可能作用，本文应用 siRNA 技术抑制ERp46 的表达，应用Real-time PCR 及Western blot 方法检测内 质网应激相关蛋白及 Insulin 表达的变化、用放射免疫法检测细胞葡萄糖刺激的 胰岛素分泌（Glucose-stimulated in