濒危植物三棱栎遗传多样性及研究.pdf

摘要 濒危植物三棱栎的[Trigonobalanus doichangensis (Camus)Forman]遗传多样性研究 摘要 三棱栎[Trigonobalanus doichangensis (Camus)Forman] 是壳斗科三棱栎属 （Trigonobalanus Forman ）三个种中唯一分布在中国的种类，是受国家二级重点 保护的、具有重要科学研究价值和园林观赏功能的珍稀濒危植物。本研究结合种 群生态学、生殖生物学和种子生理学的部分研究结果，采用分子生物学和细胞学 的有关原理和研究方法，从分子(DNA)和细胞两个层次上对三棱栎的遗传多样性 进行综合研究，检测了5 个居群的遗传多样性水平和遗传结构，首次报道了三棱 栎的染色体数目及4 个居群的染色体核型，探讨了三棱栎致濒的内外因素及历史 地理因素，提出了如何保护和丰富三棱栎遗传多样性的措施。 1. 分子水平的遗传多样性研究 用随机扩增多态DNA （RAPD ）标记对5 个三棱栎居群共99 个个体进行遗 传多样性和居群遗传结构分析。16 个引物共检测到 157 个位点，其中多态位点 83 个，占 52.87 ％。三棱栎物种水平Shannon 多样性指数I = 0.2431 ，Shannon 多样性指数平均居群内遗传多样性值为0.1151 ，在总的遗传变异中，居群间遗传 多样性占52.65 ％，居群内遗传多样性占47.35 ％；也就是说根据Shannon 指数得 出的遗传分化值为0.5265 。三棱栎物种水平Nei 基因多样度h = 0.1595 ，种内总 遗传变异量Ht = 0.1600 ，居群内遗传变异量Hs = 0.0749 ，遗传分化系数Gst = 0.5320 ，说明居群间的遗传变异占53.20 ％。 Shannon 指数和Nei 指数所得的三棱栎遗传分化值极为接近（分别为0.5265 和 0.5320 ），居群间变异量大于居群内变异量，因此三棱栎的遗传变异主要存在 于居群之间，居群间已出现强烈的遗传分化。与大多数同科植物相比，三棱栎遗 传多样性水平较低，基因流Nm 只有0.4398 ，即居群间每代迁移数Nm 远远不足 1，三棱栎居群间的基因交流极为有限，低水平的基因流明显不能防止由于遗传 漂变引起的居群之间的遗传分化。澜沧居群的遗传多样性水平明显低于其它居 群，聚类分析也发现其处于一个独特的分支，澜沧居群是一个比较独特的居群。 三棱栎偏低的遗传多样性和强烈的遗传分化，一方面说明在三棱栎演化过程 i 濒危植物三棱栎的遗传多样性研究 中可能因遭受强烈的地史变化而使其居群数量大规模减少，从而丢失部分遗传多 样性；同时也说明人类的强烈干扰造成的三棱栎生境破碎化和居群隔离，导致了 三棱栎由于遗传漂变、自交衰退等原因，加速了遗传多样性的进一步丧失。 2. 三棱栎的细胞生物学研究 通过对三棱栎澜沧、沧源、西盟、孟连4 个居群染色体的观察，发现三棱栎 体细胞染色体数目为2n ＝14，4 个居群的核型公式均为2n ＝14＝10m+2sm+2st， 核型类型均为2A 。染色体组平均总长为28.42µm ，染色体平均长度为2.03µm ， 最长染色体平均长度为2.78µm ，最短染色体平均长度为1.51µm。 对三棱栎四个居群的染色体，在常规染色体水平上进行核型分析发现，三棱 栎居群间核型变异不显著。各居群仅在染色体相对长度比（最长/最短）、平均臂 比、AS.K. （％）值上有小的变化，在染色体臂上分布的次缢痕的数目和分布也 比较稳定。综合各项数据来看，三棱栎各居群间核型变异很小，核型分析难以反 映三棱栎的遗传变异水平。 3. 三棱栎的致濒因子分析及其遗传多样性保护策略 三棱栎是壳斗科中的原始类群，有着古老的地史，目前仅分布于云南南部和 泰国北部的狭小地区。有关研究表明，三棱栎在云南的生境极度破碎化，群体相 互孤立，同时由于不合理的薪炭利用使群体数量快速下降，外来入侵物种威胁着 群体的扩增和群体的形成；三棱栎结实率低，在自然条件从种子萌发、幼苗生长 至成年的转化率低。本研究显示三棱栎的遗传多样性水平比其它壳斗科植物低， 且居群间遗传分化强烈、基因流小。因此，三