H9N2亚型猪流感病毒HA基因遗传演化及真核表达的免疫原性.pdf

摘要 猪流感病毒血清学调查结果表明，我国猪群中不仅广泛存在H1N1亚型、H3N2亚型 流感病毒，同时HgN2亚型近年来也广泛存在猪群中，为了有效的控制猪流感的发生， 研制有效的疫苗进行预防是控制流感发生和切断禽一猪一人传播途径的有效方法，目前用 于猪流感的疫苗主要是灭活疫苗，相对于禽流感疫苗由传统的全病毒灭活疫苗、亚单位 疫苗、重组病毒灭活疫苗、重组活载体弱毒疫苗、基因疫苗的发展而言，猪流感的疫苗 研发相对落后。 病毒姒基因序列测定与分析，研究我国现存流行的H9N2亚型猪流感病毒变异状况，然 后挑选同源性较高的一株病毒(14株病毒中HA基因同源性最高的)，将其HA基因克隆到 PCAGG真核表达载体上，构建基因疫苗，进行体外表达试验，然后将基因疫苗免疫BALB／c 小鼠，检测小鼠抗体生成情况及攻毒后保护情况。 首先将分离到的14株病毒进行纯化，增殖后提取病毒RNA。在通用引物作用下370C HA基因片段 水浴进行反转录，扩增病毒的cDNA，再在以01i906．O软件设计的H9N2SIV 特异PcR引物作用下，用高保真聚合酶经PcR扩增出病毒HA基因，将HA基因克隆到 所有序列，应用MegAlign进行同源性比较和进化分析。根