紫茎泽兰F3%27H基因表达载体的构建和对烟草转化的研究.pdfVIP

紫茎泽兰丹何基因表达载体的构建及对烟草转化的研究 摘 要 紫茎泽兰是一种世界性的恶性杂草，现已在我国南方和西南地区广泛分布。并且其蔓延 速度极快，引起了社会各界的广泛关注：紫茎泽兰具有很强的化感作用，能分泌化感物质抑 制周围植物的生长。在分泌化感物质的代谢途径中，类黄酮3-．羟化酶(F3IH)能被紫茎泽兰 的主要化感成分——泽兰酮诱导，推测其可能与化感作用相关。通过研究紫茎泽兰化感作用 相关的F3冒基因并分析其功能，并且进一步探索紫茎泽兰化感作用的分子机理，研究乃H 基因的部分功能及其在次生代谢中的作用，从而为紫茎泽兰的控制和管理提供理论依据，减 少紫茎泽兰所造成的经济损失和减轻其对生态系统的破坏。 本研究构建了FYH基因的过量表达载体，将其转入烟草体内，并分别进行了生理指标的 检测和分子生物学检测。 以实验室保存的含有全长乃曰基因的质粒为模板，设计带有XbaI限制性酶切位点的引 物，进行PCR扩增反应。PCR扩增产物电泳分析后将目的条带回收，与pMDl8．T载体连接， 命名为F3’H．T。利用Xba l位点，将经过序列测定正确的目的片段从pMDl8．T载体上酶切回 收。同时用Xba I将pBll21植物表达载体线性化，回收的条带经过去磷酸化处理。接着，将 DNA连接酶连接，将连接产物转化到 回收的丹胃基因片段和去磷酸化的pBll21载体用I4 大肠杆菌感受态细胞(DH5cx)中，挑取阳性克隆进行鉴定。接着利用农杆菌介导的叶盘法把 乃曰基因和对照pBIl21植物表达载体转化到烟草体内。 结果发现，转乃胃基因烟草韵花色偏浅，转空载体(PBll21载体)的烟草花色较转乃胃 基因烟草深，但比野生型烟草花色浅，其中有部分转F3／-／基因的烟草的花出现条纹状的深浅 交错的表型。表明乃何基因与次生代谢途径中花色素的形成密切相关。半定量RT-PCR结果 PCR 表明外源基因乃日在转基因烟草中均能正常转录并表达，且表达量各不相同。Real．time 检测结果显示，与野生型植株相比较，转基因植株体内FYH基因的表达量均有不同程度的下 调，推测可能是由于FYH基因的导入，其表达受到烟草内源基因表达的影响，从而使烟草花 青素成分发生改变，导致烟草的花色变淡。 对转基因和野生型烟草进行生理检测结果表明，转乃冒基因烟草比转空载体烟草和野生 型烟草的过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性都高。 引物，利用Gateway技术通过BP和LR重组反应成功构建了RNA干扰载体，并将其转化入 烟草体内。 关键词：紫茎泽兰F3’H载体构建烟草转化 紫茎泽兰丹H基因表达载体的构建及对烟草转化的研究 onConstructionof VectorofF3HGene Study Expression fn,m anandTransformation1ran atlonto upatortum Eupatoriumadenophorum Tobacco、 Supervisor：Prof．LiChunqi；ProLChengHongmei Master Candidate：ZhangSonghuan isakindof exoticweedsand in extensively Abstract：Eupatoriumadenophorumglobal spreads southandwesternsouthof fastandhavedra