花生根瘤菌遗传多样性与系统发育的分析.pdf

华中农业人学博Ij研究生学位论义 中文摘要 rRNA—RFLP、16S 本研究采用宿盘范嘲试验、表型性状；91I|定、16S rRNA序列分析、 IGS 16S．23SrDNA 术系统研究了从我国不同地域分离的55株花生根瘤菌的遗传多样性及其在根瘤菌系统发 育中的地位和相互关系。同时还进一步研究了根瘤菌在不同群体中的竞争结瘤能力以及 宿主植物和环境pH值对根瘤菌的影响，以期为高效根瘤菌剂的选育和应用奠定基础。 宿主范围研究表明供试花根瘤菌均能在花生上进行有效的结瘤并固氮：部分菌株能够 在野大豆和栽培大豆矮脚早上结瘤：所有供试菌株均不能在野豌豆上结瘤，但均能能在菜 豆上结瘤且单株瘤数较多。 丽真它种属的参比菌株聚为另一群，表明花生根瘤菌在属的水平上应属于 II两个群。在78％的水平上各群又可进一步划分为不同的皿群。其中群1分为IA和IB 两个亚群；群11分为IIa、Ilb和IIc三个丑巨群，参比菌株Bi和Be聚成IIc。 16S 亲缘关系最近，其序列差异小于1％，而与Belkanii相对较远，序列差异达到3-4％。 发育上与USDA6最近，序列差异小于1％。 rRNAIGSPCR 依16S一23S RFLP分析中IGS大小可将供试菌株分为三类。树状图 谱显示在相似性69％的水平上，供试花生根瘤菌与Bi分离而单独成群。在84％的水平 河南、山东、武昌和安徽等地的菌株组成：亚群D由红安的菌株单独组成；亚群E主 要由荆州菌株组成，还有少部分菌株来自河南和武昌等地。亚群c、亚群D和亚群E 的菌株同属于IGS．I型。 RAPD分析结果表明在75％的相似性水平上，Bj和供试花生根瘤菌可分为A、B、 C、D、E、F和G等7个亚群。参比菌株Bi独立聚为G亚群。在较高的相似性水平上 来自不同地域的菌株可进一步细分为不同的小群，并表明了地理因素对根瘤菌遗传多样 性的影响。 REP—PCR分析结果表明在60％的相似水平上，花生根瘤菌与Bi分离，进一步表明 llC、ⅡD和lIE三个亚群。 中同托生根痈蔼遗传多样性和系缆发育研究 G+C m01％；N DNA．DNA同源性分析结果表明，供试花生根瘤菌代表菌株的ATm和 AG+C t001％均小于种内变异幅度，表明供试花生根瘤菌均属于一个种。DNA—DNA同源 性分折也进一步表明供试花生根瘤菌与B．japonicum属于同一种。 综上所迷，供试花生根瘤菌具有丰富遗传多样性。在较低的相似性水平上，可分为 要由来自山东的菌株组成，还包括来自河南的HNI一4；IB由安徽、河南和武昌等地的部 均能够在野大豆上结瘤。由于供试花生根瘤菌与大豆慢生根瘤菌的参比菌株具有较高的 供试根瘤菌分类地位的范围定为大豆慢生根瘤菌花生生物型l 遗传,I-NEA性，作者建议将 和花生生物型II。r 根瘤菌竞争结瘤能力和影响因素研究表明在群体水平上快生根瘤菌与慢生根瘤菌 之问的平均竞争结瘤能力相当，但同类型根瘤菌株之间、不同类型根瘤菌菌株之间的竞 争结瘤能力仍有显著的差异。同时，宿主植物对根瘸菌的竞争结瘤也有着明显的影响。 在偏酸的条什F，慢生根瘤菌的生l之状况较好竞争结瘤能力强而在偏碱的条件F，快生 根瘤菌的竞争能力强。快慢生根瘤菌分泌的H+或OH一中和生存环境中的OH一或H’离予 以创造一个较适合-R：5-长的微环境，从而有利于存活、生长和与植物相互识别结瘤。 关键词：花生根瘤菌遗传多样性系统发育竞争结瘤影u苌素 华中农业大学博士研究生学位论文 ABSTRACT from 55 rhizobiaisolated Genetic a