抗冻肽基因四联体与口蹄疫病毒抗原表位编码序列在大肠杆菌中表达分析.pdf

抗冻肽摧』★JpU联体和u蹄疫牺毒抗原表位编码序列卉：人肠杆菌中表j占的埘究 抗冻肽基因四联体和口蹄疫病毒抗原表位编码序列 在大肠杆菌中表达的研究 摘 要 为制备抗抗冻肽(Antifreeze 中的植物信号肽基因序列去除，克隆到细菌表达载体pQE40中，转化大肠杆 在转基因植物中免疫检测AFP创造了条件。 andMouth 为在大肠杆菌和牛分枝杆菌BCG中表达口蹄疫病毒(Foot Disease Virus)三型抗原表位编码序列，设计合成了优化组合的FMDV的O、 A、C型抗原表位的编码序列，为制备小鼠抗FMDV抗体，将此序列克隆到 抗原表位编码序列的融合表达的蛋白质带。 关键词：抗冻肽基因J口蹄疫病毒，抗原表位．表选。77 抗冻肽皋…pU联体和Lj蹄疫粕毒抗原表位编码序列n人肠杆菌中表达的埘究 一引言 抗冻蛋白(Antifreeze 中最早发现的热滞蛋白的总称，AFPs可以降低血液和其他组织液的冰点温 度。J1‘31 物叶间隙中，显示了改善植物的抗冻性的可能性【4J。为提高AFP基因在植物 中的表达效率，1996年，本实验室根据双子叶植物和大肠杆菌中密码子使用 频率的偏爱度，在不改变氨基酸顺序的前提下，改变密码子摆动部位的碱犟 同时考虑不能因为碱基的改变而出现常见限制酶切位点，并考虑到植物中分 成熟肽基因的两端是Sail和XhoI限制酶切位点，可以方便地构建成AFP 基因多联体【5“J，并转化了烟草【7]。我们认为，研究AFP基因在植物中表达 blot、Northern 不但要进行Sourthern blot检测整合和转录，而且一定要用 Western blot检查抗冻蛋白和转基因植物的抗寒生理学各项指标。转基因植物 抗寒性提高，而且半致死温度、叶片电解质漏出率等指标与表达的AFP含量 呈『F比，才是转基因植物中耐寒性的提高是由于AFP基因表达所致的直接依 据。为检测本室已获得的转基因烟草和正在转化的烟草植株中表达的抗冻蛋 白含量，一种可行的方法是利用免疫检测的方法，而要进行这种检测，必须 有抗体，首先要有抗原即抗冻肽。基于以上目的，本实验在本室已构建的抗 冻肽基因四联体pAF04[51的基础上，去除植物信号肽基因序列，继而将AFP EcoliMl 5中表达，得到与预期大小片段相同的蛋白质带，进而用于制备抗 抗冻蛋白抗体来检测转基因植株中表达的AFP。 本室承担的另一个课题是利用牛分枝杆菌BCG作预防和治疗性DNA载 体的基础研究，其中一部分内容为口蹄疫病毒抗原表位编码序列在大肠杆菌 和BCG中表达。本文承担的是口蹄疫病毒抗原表位编码序列在大肠杆菌中 表达的研究。口蹄疫病毒(Foot 羊、猪等30多种偶蹄类动物的传染性强、死亡率高、感染持续时间长的病毒， 与脊髓狄质炎病毒、鼻病毒等同属于细小RNA病毒科，基因组是单一8，400 堕堡鉴生堕!!壁堡塑型业壅丛查堕堕查丝塑!!壁型生叁塑壁塑生耋竺塑业!! 7种血清型60多亚型并容易变异，因而全病毒死疫苗必须全价或具有A、0、 C型及地方流行型。四种外壳蛋白中VPl的134一168氨基酸钱基存各型』}1即 含有保守残基又是引发中和抗体和保护力的主要抗原18】，劂而丌发了合成多 肽疫苗1…、融合多肽疫苗I”“11，在实验动物和牛、猪中均诱导高滴度中和抗 50．1601121。 体生成的B细胞抗原表位为135．144，T细胞抗原表位为135．144，l 用Al2型的VPl的137．168串联二聚体多肽免疫牛，诱导保护反应，其抗血 清与三种亚型发生交叉反应【l”。x射线晶体衍射研究证明FMDV与宿主细胞 复合体的x线晶体学研究证明15肽中RGD基序直接参与抗体分子的几个 CDR(互补决定区)之间的相互作用11“。基于以上研究结果，本实验室根掘 国内外报道的三型有效人工合成的FMDV多肽疫苗中筛选了抗原表位编码