羽扇豆醇对人肝癌细胞Wnt通路影响研究.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………一1 英文摘要…………………………………………………………………·t 5 英文缩写…………………………………………………………………一8 研究论文 羽扇豆醇对人肝癌细胞Wnt通路影响的研究 前言…………………………………………………………………一9日U舌…………………………………………………………………一 1 材料与方法…………………………………………………………一1 结果…………………………………………………………………··20 附图…………………………………………………………………一22 附表…………………………………………………………………一27 讨论…………………………………………………………………··30 结论…………………………………………………………………一33 参考文献……………………………………………………………一33 综述羽扇豆醇、Wnt通路与肿瘤的研究 ………………………．．36 致谢………………………………………………………………………一47 个人简历…………………………………………………………………··48 中文摘要 羽扇豆醇对人肝癌细胞Wnt通路影响的研究 摘 要 肝细胞癌(Hepatocellular 恶性肿瘤，在全部的癌症中，它是引起死亡的第三大原因，其死亡率仅次 于胃癌、食管癌。之所以我国的肝癌发病率是世界上最高的，因为我国是 一个肝炎大国。肝癌现己成为严重威胁人类身体健康的主要疾病之一。肝 癌患者初期症状很不明显，晚期主要表现为肝区疼痛、乏力、消瘦、黄疸、 腹水等症状。当患者出现典型临床表现的时候绝大部分己属于中晚期，失 去手术机会，预后很差。自然生存期绝大多数不超过半年。目前在肝癌众 多的治疗方法中，手术仍然是国内和国际上公认的首选的最佳治疗方法， 但肝癌术后存在很高的复发倾向，已有研究发现，很多原发性肝癌根治性 切除术后的复发率高达70％，复发时间多在术后两年内，肝癌的高复发率 使很多肝癌患者丧失了宝贵的生命，如何预测肝癌很高的复发率，以及有 效的抑制复发是提高肝癌治疗的关键。 肝癌的发病机制繁杂，是多要素、多基因、多阶段协同参与的结果， 其中细胞信号传导途径异常对其发生、发展起着举足轻重的作用，在诸多 明B．catenin蛋白在促进肿瘤的发生发展的过程当中起着很重要的作用， Wnt／B．catenin转导途径在正常的细胞中是无激活的。在正常的细胞中， 在细胞膜处，B—catenin只作为一种细胞骨架蛋白对维持同类细胞的黏附、 防止细胞的移动发挥作用，唯有当Wnt信号分子与细胞膜上的特异性受 体蛋白结合后激活胞内的蛋白，使B．catenin避免被磷酸化而不被降解， 定水平时，就能够向细胞核转移，与细胞核中的TCF结合，靶基因c—MYC 和cyclin不能转录，细胞周期停止，Wnt通路关闭。 是否存在有效的药物来抑制肿瘤引发了人们的思考，所以迫切找到一 中文摘要 种高效低毒的抗肿瘤药物成为人们的当务之急。羽扇豆醇普遍存在于多种 瓜果、蔬菜及中草药等植物中，具备较强的抗炎、抗基因突变和抗疟疾的 功用。最近的研究提示羽扇豆醇具有抗癌作用，加之对人体的的低毒性， 因此备受关注。 前期实验证实羽扇豆醇对肝癌有抑制作用，但其确切机制尚不清楚， 文献报道可能与Wnt通路阻滞有关。 目的：通过羽扇豆醇干预实验，检测Wnt3和13．cateninmRNA和蛋 白的变化，探讨羽扇豆醇的作用机制是否与Wnt信号转导通路阻滞有关。 方法：常规培养人肝癌细胞株HepG2；分对照组和试验组。常规培 养对照组细胞，试验组细胞分别施加不同浓度的羽扇豆醇作用不同时间， mRNA表 达的变化，以6．肌动蛋白作为内参照标准，通过凝胶扫描仪对扩增产物 进行DNA电泳条带的光密度