猪传染性胸膜肺炎放线杆菌LAMP检测方法的建立及其ApxⅣ毒素部分功能的研究.pdfVIP

摘要 ／…／IWIINIIHI．IH。IW3／／／／／I。I 猪传染性胸膜肺炎(PorcineContagious 万方数据 IV基因序列中 分析ApxIV基因中的可能存在抗体表位区并设计一对引物扩增出Apx 21a(+)成功构建表达载体并转化表达菌BL21，通过各位表达条 目的片段连接至pET 件的优化，成功表达了目的蛋白，经过经过破碎菌体及SDS．PAGE检测，蛋白以包 涵体的形式表达。将重组表达的蛋白进行纯化、复性步骤后，经Western．blot抗原性 分析表明所得到的重组蛋白纯度较高且具有良好的反应原性。再通过盐析的方法提取 了APP5型的ApxI、ApxII两种溶血外毒素。最后，将灭活的含有不同剂量的重组 II、灭活菌使用白油为佐剂分别制备疫苗，采取 表达ApxIV与灭活的ApxI、Apx 背部多点注射的方式免疫小鼠，再以我国常见的血清5型的强毒株以10倍于LD50 IV含量的增加，其免疫保护 的剂量进行攻毒，结果显示，各组疫苗中随着重组Apx IV能提供给免疫小鼠对相同血清型细菌攻 率也随之升高，表明本研究所重组的Apx IV作为额外成分添加后可增强亚单 毒一定的免疫保护作用。综上所述，重组的Apx 位疫苗的免疫保护力，但是，至于是如何提高灭活苗免疫保护效果的，其机理还有待 进一步研究。 IV；免疫保护 关键词：猪传染性胸膜放线杆菌；LAMP；Apx 万方数据 ABSTRACT Actinobacillus Porcine iscaused by ContagiousPleuropneumonia characterizedanacuteorchronicdisease． andleadsto and in is by pleurisypneumoniapigs Inrecent diseaseis intheworldoftheindustrializedcountriesin years，this widelypopular asoneofthefive infectious the losstothe listed industry,is major pig，tobringgreat pig diseasecell diseasetoharmthe worldwide．Forthe ofthis by pigindustry prevention inactivatedvaccinebecausethe ofAPPare each