紫薯甜菜碱醛脱氢酶基因BADH克隆及其功能分析.pdf

本研究是在“重庆市甘薯工程技术研究中 心’’平台支持下完成的 本研究由国家863计划项目：甘薯花色素苷 和13．胡萝卜素植物代谢产物生物反应器研 制(2011AAl0A206) 国家863计划项目：甘薯淀粉品质及营养成 新世纪优秀人才支持计划：项目编号NCET- 12．．0930 中央高校基本科研业务费创新团队项目：项 目编号XDJK2013A024 目录 摘要………………………………………………………I 第l章文献综述……………………………………………1 1．1背景概况………………………………………………．．1 1．1．1甘薯概况…．．…………………．……………………1 I．1．2紫肉甘薯来源…………………………………………2 1．1．3紫肉甘薯研究现状………………………．……………2 1．2植物耐受非生物胁迫基因工程改良……………………………3 1．2．1植物耐受非生物胁迫的需求………………………………3 1．2．2植物非生物胁迫的信号传导机制和耐受机制…………………．4 1．2．3基因工程改良对植物耐受非生物胁迫的方法和作用……………．5 1．2．4新的研究方向和展望……………………………………7 1．3甜菜碱等渗透小分子在植物耐受非生物胁迫中的作用………………7 1．3．1甜菜碱的性质…………………………………………7 1．3．2甜菜碱的耐受作用机制…………………………………．8 1-3．3甜菜碱合成途径及关键基因………………………………9 1．4甜菜碱醛脱氢酶研究相关背景………………………………．10 1．5甜菜碱醛脱氢酶功能分析和改良实例…………………………．10 第2章绪论………………………………………………13 2．1研究的目的和意义………………………………………．．13 2．2研究范围和内容……………………………．……．……．．13 2．3技术路线……………………………………．…．……．13 第3章材料与方法…………………………………………．15 3．1实验材料和试剂……．……．…………．…………………．15 3．1．1植株材料…．．…．．………．…．…．．……．…．…．……．15 3．1．2菌株和质粒材料．．．．…．．．．．．．…．…．．．．……．．．．．．……．．15 5 3．1．3实验设备和仪器．．．．…．．．．．．．…．．．．．．．．．…．．．．．．．…．…．．1 5 3．1．4实验试剂和耗材．．．．……．……．……．．．．……．．．……．．1 3．1．5培养基和常规实验试剂配置……………………………．．16 3．2常规实验方法和步骤……．………．………………………18 3．2．1植物总RNA的提取和检测………．………………………18 3．2．2琼脂糖凝胶电泳检测DNA扩增产物………………………．．19 3．2．3目的条带的胶回收．………………………．…．………．19 3．2．4中间载体构建(T载体连接)………………．…………．．19 3．2．5载体构建(酶切产物与工程质粒连接)……………………．19 3．2．6感受态细胞的制备……………．………………………19 3．2．7 T连接产物或重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞……………．．20 3．2．8质粒的抽提……．…．………………………………．．20 3．3IBBADH基因的克隆和分析…………………………………．2l 3．3．1紫薯总RNA的提取和检测………．………………………2l 3．3．2以紫薯总RNA合成紫薯的第一链cDNA……………………．．21 3．3．3硒删硝基因全长CDS的克隆……………………………．．2l 3．3．4乃删刎基因的生物信息学分析…………………………．．22