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瓣测豁以组蛋白Hlo为骨粱跳耗向予EGF受体的基强学入系境的梅建 中文攘婺 新型的以组蛋白H1o为骨架的 靶翔于EGF受体的基因导入系统的构建 博士研究生 戴菲寒 导 师 顾健人 复要大学医学院上海审肿瘤研究所 中文摘要 本文构建了一张以缀蛋白H1。为骨架，靶向于表皮生长因子(EGF)受体的新烈 基因导入系统。其创新憔在于，把基因导入系统中的各种功能成分组建成为融合基因， 在大肠杆菌中表达，是化学合成基因导入系统的延续，属相关领域的首次尝试与报邋。 GE7 并麓，花费器责，限麓了滋一步豹应用。基戮工程方法§§解决这黧闯题，但在大酝轷麓 o为骨絮的基因导入系统。我 体内不可能表达polylysine，因此我们设计了组蛋白HI H1 状得九个融合蛋白的表达』芋列。所有的表达序列均克隆在pT7450原核表达载体中。 新型的咀组蛋白H10为骨架的靶向于EGF受体的基因导入系统的构建 中文摘要 融合蛋白的表达宿主菌是HMSl74(DE3)，表达产物通过SP G一50纯化。 所有的融合蛋白与质粒DNA混合后，都能阻滞DNA在1％琼脂糖凝胶中的迁移， 电泳结果表明融合蛋白具有结合DNA的能力。DNA与蛋白结合的最佳质量比为1：3。 胞株、BEL一7402裸鼠皮下移植瘤作为靶细胞、组织以检测融合蛋白的生物学活性。 U20S细胞表面未检测出EGF受体的表达，作为导入实验的阴性对照。体外导入实 入实验筛选获得的最佳基因导入系统。 瘤组织中的表达随时间推移的变化：在皮下瘤周注射后12小时，就有p．gal基因的表 达，24小时表达达到高峰，48小时开始下降，96小时、7天、10天表达继续下降， 还随复合体剂量的增加而上升。含DNA199的复合体是皮下瘤周注射的最佳剂量。 这一设计思路将基因导入系统中各种功能成分连接后通过基因工程方法表达，属 首次尝试与报道，因此仅仅是一个起点。由于给药后，复合体颗粒要历经细胞内外的 重重障碍，才能到达靶细胞核，在整个过程中，有众多干扰因素阻碍着复合体的导入 进程，增加复合体颗粒的稳定性，避免被降解是该研究今后的发展方向。通过聚乙二 醇化可使DNA与融合蛋白形成的复合体稳定性增加。这是在颗粒进入靶细胞前，维 持稳定不被降解的对策。通过对复合体颗粒的修饰，完善基因导入系统，以排除细胞 内外的干扰，将为今后的临床基因治疗奠定基础。 关键词：表皮生长因子，靶向性非病毒基因导入系统，融合蛋白，肿瘤基因治疗 新型的以组蛋白HI o为骨架的靶向于EGF受体的基因导入系统的构建 英文摘要 o TheConstructionofHistoneHIBasedNovel Gene EGF Delivery systemTargeting Receptor Ph．DStudent：DajFei-han Jian—Fen Supervisor：Gu Abstract Theconstructionofanovel basedonHistoneH10