新型低密度脂蛋白吸附剂的制备及其性能的分析.pdf

∽旧08 6 4 R 9 本文工作的目的是研制新型低密度脂蛋白吸附荆，通过血液灌流技术选择 一一， 性地清除高脂血症患者血浆中致病因子——低密度脂蛋白(LDL)，用于高脂血 症的治疗。(全文共分为六章。在论文工作中，基于胆固醇修饰的葡聚糖主链上 ＼ 的疏水基团一胆固醇，能通过疏水作用力嵌入LDL单层膜中并溶于脂质体内 部，与LDL相结合的原理，将胆固醇修饰的葡聚糖作为配基固载到球状琼脂凝 胶上制备了一种新型低密度脂蛋白吸附剂，并对吸附剂的性能作了较系统的研 究。 前言介绍了低密度脂蛋白及其免疫吸附疗法的研究进展，提出了选题的依 掘及预期目标。L—tL 我们基于琼脂具有理想的机械强度和良好的血液通透性，成功的合成出粒 一_ ， 度均匀的10％球状琼脂凝胶，作为吸附剂的载体材料。f以环氧氯丙烷为活化试 ．，Z一 剂对其进行功能基化，使载体上环氧基含量达到110umol／g江，i． 基于胆固醇修饰的葡聚糖(CHD)通过疏水作用力能与低密度脂蛋白发生 7 结合反应，首次提出了以胆固醇修饰的葡聚糖为配基制备低密度脂蛋白吸附剂， 这也是本文主要创新之处。工作中，我们通过胆固醇和葡聚糖合成出能固载在 载体上的配基，并较详细地考察了胆固醇修饰的葡聚糖在水溶液中的性质。一 f 通过荧光探针方法研究CHD在水中的溶液性质。i结果表明，CHD浓度在 一， ．I一 01mg／ml左右开始自聚集形成自聚集体。自聚体形成的作用力源于胆固醇聚集 时的疏水作用力。研究了分子量和胆固醇含量对嵌二萘在溶液中荧光发射强度、 溶解度、嵌二萘与CHD自聚集体的结合常数及自聚集体中“乳胶粒”数目的 影响；结果表明，胆固醇含量对CHD自聚集体液态性质的影响较大；胆固醇 含量增加，使得嵌二二萘在溶液中的荧光发射强度、溶解度、嵌二萘与CHD自 聚集体的结合常数及自聚集体中“乳胶粒”数目都呈现增加的趋势。)～c一、 通过高效液相色谱、透射电镜、荧光萃灭方法和溶液表而张力的测定，研 、 一 ／ 究了自聚集体在水中的微观结构。偿果表明，CHD在水溶液中自聚集而成纳米 一…、 微粒；纳米微粒中的胆固醇“乳胶粒”使得葡聚糖水凝胶中出现了非共价键的 交联结构。纳米微粒中的胆固醇“乳胶粒”完全被葡聚糖的亲水骨架包围。、～， (研究了分子量和胆固醇含量对纳米微粒分子量，直径及微粒“乳胶粒”中 月}i固醇数目的影响。结果表明，胆固醇含量增加将导致纳米微粒的分子量的增 加、微粒的直径的减小和微粒“乳胶粒”中脾固醇数闷的增加。分子量增加将 导致纳米微粒中CHD分子数目的减小，微粒直径减小：分子量增加对纳米微 。 }{中“乳胶粒”数目没有明显的影响0 我们通过浊度和凝胶色谱测定方法筛选LDL配基，确定了低密度脂蛋白 ～ 吸附剂配基的分子量和胆固醇含量。l钰葡聚糖配基与LDL和VLDL的相互作 用中，葡聚糖配基与VLDL溶液的浊度大于CHD与LDL混合溶液的浊度。葡 聚糖配基浓度为0．3mg／ml时，溶液的浊度最大。葡聚糖分子链上胆固醇含量为 4个／100个糖环时，溶液的浊度最大，表明LDL或VLDL聚集的程度最大。在 lE较短的时间内，葡聚糖配基与LDL或VLDL的浊度就可达到最大值。Ca”对 葡聚糖配基与LDL或VLDL的相互作用没有任何影响。、 {’高效液相色谱的研究结果表明，CHD与LDL结合后，分子量大大增加。 表明，CHD将多个LDL分子连接在一起，使得LDL分子聚集。通过筛选，我 们确定吸附LDL的配基为分子量70KD，100个葡聚糖糖环上含有4个胆固醇 的CHD。，t 我们确定了环氧化琼脂凝胶对胆固醇修饰的葡聚糖固定化反应的最佳条