Pescadillo在人颅内星形细胞瘤中的表达及其对胶质瘤细胞凋亡、增殖的影响.pdf

Pescadillo在人颅内星形细胞瘤中的表达及其对胶质瘤细胞凋亡、增殖的影响 Pescadillo在人颅内星形细胞瘤中的表达及其对胶质瘤细胞凋亡、 增殖的影响 专 业： 外科学 博士研究生： 陈 昆 导 师： 黄正松教授 中山大学附属第一医院神经外科510080 摘 要 研究背景 胶质瘤是颅内原发肿瘤中发生率最高的恶性肿瘤，其中绝大部分是星形细胞 瘤。由于恶性胶质瘤生物学行为上的高侵袭性，因此现有的治疗手段(包括手术、 放疗和化疗等)均难以奏效，恶性胶质瘤预后总体较差，一年生存率仅约30％。 近年来研究表明，肿瘤细胞凋亡机制受遏、细胞死亡不足和细胞异常增殖、细胞周 期调控紊乱均是胶质瘤综合治疗失败的原因，因此研究胶质瘤细胞凋亡和细胞周 期调控的分子机制及寻找关键靶位点成为了胶质瘤研究领域的热点之一，对最终 阐明胶质瘤发生发展的机制和治愈该病意义重大。Pescadillo是近年发现的一个进 化上高度保守的基因，最近有研究表明其可能参与了肿瘤的发生和发展，但迄今 为止，对于PescadiUo在胶质瘤发生发展中的生物学功能及其分子机制的研究仍处 于起步水平，目前仅知Kinoshita等采用免疫印迹检测方法在5例恶性胶质瘤中检 瘤旁组织。但Pescadillo的表达与胶质瘤临床不同分级、患者的预后等临床病理特 征是否具有相关性则完全不明确，其在胶质瘤发生发展中的意义及分子机制也不 清楚。因此研究PescadiUo如何参与胶质瘤的发生和发展、如何调控胶质瘤细胞增 殖和抗凋亡功能，将为阐明恶性胶质瘤发生、发展的理论提供新的内容，对胶质 瘤早期诊断及治疗亦有一定的意义。 Pesc冶dilio在人颅内星形细胞瘤中的表达及其对胶质瘤细胞凋亡、增殖的影响 研究目的 1．研究Pescadillo在人颅内星形细胞瘤中的表达情况及其表达水平与临床分级和 患者生存预后的关系。 2．研究Pescadillo在正常星形细胞、胶质瘤细胞和星形细胞瘤配对组织中的表达。 3．研究上调、下调Pescadillo表达对胶质瘤细胞凋亡、增殖的影响，并初步探讨 其作用机制。 研究方法 1．用免疫组化方法对221例星形细胞瘤(其中获得随访追踪资料患者共168例) 和5例正常脑组织病理切片标本进行Pescadillo表达的检测。实验数据采用t 检验、 x 法进行分析，pO．05为具有统计学显著性差异。 2．用半定量PCR和定量PCR法对正常星形细胞系、胶质瘤细胞系(共6株)和 星形细胞瘤配对组织中mRNA水平上Pescadillo的表达进行检测；用免疫印迹 蛋白在恶性胶质瘤细胞中的表达定位。实验数据采用t检验、x2检验进行分 析，p0．05为具有统计学显著性差异。 3．构建pMSCV／Peseadillo和pSuper．puro 们已建立的逆转录病毒载体介导eDNA及RNAi的表达系统，建立稳定表达 Peseadillo eDNA和RNAi的恶性胶质瘤细胞系：用紫外线诱导细胞凋亡、 对胶质瘤细胞凋亡的影响；用MTT法绘制细胞生长曲线、BrdU掺入法和软琼 脂集落形成实验来检测Pescadillo表达上调、下调后对胶质瘤细胞增殖的影响； 用免疫印迹法检测Pescadillo表达上调、下调后胶质瘤细胞凋亡相关蛋白和细 胞周期相关蛋白的变化。实验数据采用t检验、 x2检验进行分析，p0．05 为具有统计学显著性差异。 研究结果 Ⅱ Pescadillo在人颅内星形细胞瘤中的表达及其对胶质瘤细胞凋亡、增殖的影响 级)星形细胞瘤Peseadillo染色阳性率无统计学显著性差异。按其平均光密度 值(MOD)，星形细胞瘤患者Pescadillo表达较正常脑组织明显增高。 2．星形细胞瘤WHOI级和II级患者间Pescadillo表达水平无统计学显著性差异； 星形细胞瘤WHOIV级患者Pescadillo高表达比例达90．O％，而WHOIII级患 者为55．0％，有统计学显著性