《分子生物学北京培训内部讲义》.docVIP

第一部分 DNA重组技术 实验一 聚合酶链反应 【实验目的】 掌握基本PCR扩增方法及PCR反应条件优化。 【实验原理】 用PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内DNA的复制过程。主要是利用DNA聚合酶依赖于DNA模板的过程，模仿体内的复制过程，在附加的一对引物之间诱发聚合酶反应。PCR全过程是由变性、模板与引物结合（复性）及引物延伸三个步骤组成的不断重复的过程。每次重复的三个步骤称为一个周期，经过25～30个周期之后，PCR产物以指数方式增加可达106 ～107。目前，人们已根据各种用途设计了不同的特殊PCR，本实验介绍的是经典PCR技术。 【实验材料】 （一 ）模板DNA： 模板可以是单链或双链；可以是染色体DNA；亦可以是克隆的质粒DNA。本实验使用克隆的质粒p-FHL2 (1μg/μl)经100倍稀释作为模板。 表 PCR反应体系模板量 以50ul PCR 反应体系为例 人基因组DNA 0.1～1μg 大肠杆菌基因组DNA 10～100ng 质粒DNA 0.1～10ng λDNA 0.5～5ng （二 ）2×Taq PCR MasterMix: 0.1 U Taq Polymerase/μl，500 μM dNTP each，20 mM Tris-HCl (pH8.3)，100 mM KCl，3 mM MgCl2，其它稳定剂和增强剂，使用终