MLL2在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3中表达和作用.pdf

目 录 中文摘要………………………………………………………………………………．．1 英文摘要………………………………………………………………………………．4 研究论文 MLL2在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3中的表达和作用 前言……………………………………………………………………………………．8一日Ⅱ舌…………………．………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………………．9 结果……………………………………………………………………………………………．．16 附图…………………………………………………………………………．．19 附表……………………………………………………………………………24 讨论……………………………………………………………………………………………………25 结{念……………………………………………………………………………………………………27 参考文献………………………………………………………………………27 综述MLL2基因在淋巴瘤中的作用的相关研究…………………………．．30 致谢…………………………………………………………………………………．．35 个人简历………………………………………………………………………………36 中文摘要 MLL2在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3中的表达和作用 摘 要 目的：应用混合谱系白血病2(MLL2)抗体体外作用于弥漫大B细胞 淋巴瘤细胞株LY一3以及体内作用于种植人LY一3细胞的荷瘤鼠，以探索研 究MLL2抗体在弥漫大B细胞淋巴瘤中诱导细胞凋亡的作用。 方法： 1人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3细胞的培养、传代 人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3细胞培养于体积分数为10％胎牛 的培养箱中培养，48-72小时传代一次。细胞生长良好，悬浮成团。本研 究相关实验均采用对数生长期LY一3细胞。 2 RT-PCR检测LY-3细胞中存在MLL2基因表达 取LY-3细胞悬液，提取总RNA，在核酸蛋白测定仪上测定浓度及纯 度，根据反转录试剂盒具体实验步骤，使RNA反转录为cDNA，配制PCR 3’，后引 time 3’，将其置于RealPCR仪上进 物序列为5’CTATGAAAGTCAGCCATC ulMarker，5 行PCR扩增，然后在电泳槽中点样，由左向右依次加样：5 u1 ul GAPDH，5MLL2，点完后，调电泳仪各参数进行电泳：U：120V；A： 60A；T：35min，电泳结束，凝胶成像系统观察结果。 3MTT法检测MLL2抗体作用于LY-3细胞对细胞增殖的影响 型96孔板，随机分为对照组及MLL2抗体实验组。对照组及MLL2抗体实 验组均设3复孔，对照组各孔中加入lOOul细胞培养液，实验组向各孔中 分别加入以lOOul细胞培养液稀释的不同浓度的MLL2抗体，使其终浓度 于37。C、5％C0：、饱和湿度条件的培养箱中孵育，分别于加药后第24小时、 48小时向各孔中加入20ui MTT(5mg／m1)溶液，置于培养箱内继续孵育 4小时，离心培养板，吸去上清，每孔再分别加入150ui二甲基亚砜，振 荡器振荡至结晶充分溶解，置于酶标仪492nm条件下，测定各孔的吸光度 中文摘要 值。 4MLL2抗体体内作用于种植人LY一3细胞的荷瘤鼠观察其抗肿瘤作用 本实验所用荷瘤鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司，共15 只，均为3-4周龄Balb／c雌鼠，后饲养于省四院动物实验中心。首先于