四株南极来源真菌次级代谢产物的结构及其抗肿瘤活性的研究.pdf

四株南极来源真菌次级代谢产物的结构及抗肿瘤活性研宄 四株南极真菌次级代谢产物的结构及抗肿瘤活性研究 摘 要 两极地区的自然环境具有低温、干旱、强辐射等特点，这也造就了极地微生 物在基因组成、酶学特性以及代谢调控等方面独特的分子生物学机制与生理生化 特性。近年来的研究显示，极地微生物在低温适应机制、新药开发、新型酶制剂 研制、新型保健食品开发等方面具有广阔的前景。本论文以南极陆地来源的真菌 作为研究对象，开展活性次级代谢产物的结构和生物活性研究。研究内容主要包 括：活性菌株的分离筛选、代谢产物的分离纯化及结构鉴定、部分化合物生合成 途径的推测、单体化合物生物活性的初步评价、活性化合物作用靶点的初步探讨。 从采自南极长城站及中山站附近的苔藓下层土、地衣下层土和苔藓等7个样 品中共分离得到真菌200株，放线菌17株，采用P388细胞毒活性筛选，结合 TLC及HPLC化学筛选模型，得到6株活性真菌，从中选取苔藓下层土来源的 树粉孢属真菌pf坊D沈门加船扩甜刀c日，z，聊GW3．13、地衣下层土来源的子囊菌亚门真 文的研究对象。 对四株目标活性菌株发酵产物利用萃取、薄层色谱、硅胶柱色谱、LH．20凝 胶柱色谱、反相高效液相色谱等提取分离纯化手段，从树粉孢属真菌 Df疥。沈刀加胛护纠，?c口砌垅GW3—13的发酵产物中分离得到了32个单体化合物 GWT2—24的发酵产 个单体化合物(33．38)；从绳状青霉尸P，zfcfⅣf甜m屈，?七甜，Ds蹦m 物中分离并解析了16个单体化合物(39．54)；从桔青霉尸P胛fc讲砌聊c咖砌甜聊 Gw8—28共分离纯化得到5个单体化合物(56—60)。 个单体化合物的结构(F蛾1)，结构类型包括：甾体类化合物4个(31，32，56， 摘 要 现新化合物23个，包括7个含多硫键的二酮哌嗪类化合物及其衍生物(1，2，4—7， 11)、3个较罕见的氨基酸0【位被羟基或者甲氧基取代的二酮哌嗪类化合物(13， 缩酮螺环结构)、1个带有环氧结构的环己烯类化合物(37)、一个苯醌类化合物 CD并结合化学转化实验推测了含硫二酮哌嗪类化合物(1，2，4—7)的绝对构型。 采用MTT法和SRB法，对分离得到的单体化合物的抗肿瘤活性进行了初步评 用ELISA等方法对活性化合物的分子靶点和作用机制进行初步探索。其中：1．新 和A2780细胞的IC50分别为0．013、0．003、0．011、O．022和O．028 pM；该化合物在 明化合物(1)对小鼠H22肝癌移植瘤模型具有体内抗肿瘤活性；目前对化合物(1) 的临床前药效学评价正在进行当中。 本论文从4株真菌次级代谢产物中共分离鉴定了54个化合物，其中18个新 化合物。新化合物l，2，4．7和11为首次报道的南极嗜冷真菌来源的的含硫二 酮哌嗪类化合物，新化合物13，15和16为含硫二酮哌嗪生合成过程的支路产物； 评价了22个单体化合物的抗肿瘤活性，发现了7个活性较强的化合物，其中化 合物(1)体外细胞和分子水平有效，是一个新颖的多靶点的抗肿瘤先导化合物； 初步评价了含硫二酮哌嗪类化合物的HIF．1抑制活性。共分离筛选获得6株抗肿 瘤活性菌株，发现了能产生系列抗肿瘤活性化合物的树粉孢属真菌D砌D如门办D胛 GwT2—24，为开发真菌抗肿瘤药物提供了重要的药用资源活性菌株。 关键词：南极真菌；活性筛选；次级代谢产物；抗肿瘤 四株南极来源真菌次级代谢产物的结构及抗肿瘤活性研宄 AntarcticStrains： MetaboKtesofFour Fungal Secondary StructuresandBioactivities Abstract envir011mentwithIow radiationisthe Thenatural